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ThermoU-5000HPLC仪器操作规程

一、目的

本规程旨在规范ThermoU-5000高效液相色谱仪（以下简称U-5000HPLC）的操作流程，确保仪器安全、稳定、准确运行，保障分析结果的可靠性与重复性，并延长仪器使用寿命。本规程适用于所有经授权操作U-5000HPLC的实验室人员。

二、适用范围

本规程详细规定了U-5000HPLC从开机准备、系统平衡、样品分析到关机维护等各个环节的标准操作步骤及注意事项，适用于常规的定性与定量分析工作。

三、安全注意事项

1.操作人员资质：操作人员必须经过专业培训，熟悉本仪器的基本原理、结构及操作方法，了解相关化学试剂的安全特性，并严格遵守本操作规程。

2.个人防护：操作前应穿戴好适当的个人防护装备，包括实验服、防护眼镜及耐化学腐蚀手套。处理有机溶剂时，应在通风橱内进行。

3.化学品安全：使用的流动相和样品需符合实验室化学品安全管理规定，避免皮肤直接接触，防止吸入其蒸气。废弃溶剂应分类收集并按规定处理。

4.高压警示：HPLC系统在运行时存在高压，严禁在未泄压的情况下拆卸管路、接头或色谱柱。只有在泵完全停止且系统压力降至零后，方可进行相关部件的更换或维护。

5.用电安全：确保仪器供电稳定，接地良好。避免湿手操作电源开关。定期检查电源线及插头是否有破损。

6.火灾预防：实验室应配备合适的灭火器材。避免在仪器附近放置易燃易爆物品。

四、仪器原理及主要组成

U-5000HPLC基于高效液相色谱原理，利用样品中各组分在固定相（色谱柱填料）和流动相之间分配系数的差异，当流动相携带样品通过色谱柱时，各组分在两相间进行反复分配，从而实现分离。分离后的组分依次进入检测器，产生相应的电信号，经数据处理系统记录并绘制成色谱图，用于定性和定量分析。

主要组成部分通常包括：溶剂输送系统（输液泵）、进样系统（自动进样器）、分离系统（色谱柱及柱温箱）、检测系统（如紫外可见检测器、二极管阵列检测器等）以及数据处理系统（工作站软件）。

五、操作流程

5.1开机前准备与检查

1.环境检查：确认实验室温度（通常建议15-30℃）、湿度（通常建议40-80%）在仪器要求范围内，无剧烈震动及腐蚀性气体。

2.流动相准备：根据分析方法要求，配制所需的流动相。流动相需使用色谱纯试剂，并经0.45μm（或更小孔径）滤膜过滤，超声脱气处理。检查溶剂瓶中溶剂是否充足，必要时添加。

3.样品准备：样品需溶解在合适的溶剂中，并用与流动相相匹配的滤膜过滤，去除颗粒物，防止堵塞色谱柱和进样器。

4.色谱柱检查：根据分析方法选择合适的色谱柱。检查色谱柱型号、规格是否正确，柱身有无破损，两端接头是否完好。

5.仪器状态检查：检查仪器各部件连接是否正确、紧密，特别是溶剂管路连接是否牢固，有无漏液痕迹。确认检测器流通池内无气泡或污染物。

5.2仪器开机与初始化

1.开启外设：依次打开打印机、电脑等外设电源。

2.启动工作站软件：运行ThermoHPLC工作站软件，等待软件启动完成。

3.开启仪器主机电源：打开U-5000主机电源开关。此时仪器可能会进行自检，注意观察仪器面板指示灯或工作站软件提示，确认自检通过。

4.通讯连接：在工作站软件中，确认与仪器各模块（泵、自动进样器、柱温箱、检测器等）通讯正常。

5.3方法编辑与调用

1.新建或调用方法：在工作站软件中，根据分析需求新建分析方法，或从方法库中调用已保存的标准方法。

2.方法参数设置：在方法编辑界面，仔细设置各项参数：

*泵参数：流动相组成（比例或梯度洗脱程序）、流速、柱前压上限。

*柱温箱参数：设定柱温。

*检测器参数：选择检测波长（如紫外检测器）、带宽、参比波长（若有）、采样频率、检测池温度（若可调）。

*自动进样器参数：进样体积、洗针程序、进样模式（如部分充满、完全充满）、样品盘温度（若有）。

*数据采集参数：采样时间、延迟时间、积分参数等。

3.方法保存：确认所有参数设置无误后，保存方法。

5.4系统平衡

1.安装色谱柱：若更换色谱柱，需小心将色谱柱安装到系统中，注意流向标识，确保连接紧密，避免死体积。

2.purge排气：为避免管路和泵头中存在气泡，需对泵和溶剂管路进行purge操作。在工作站软件中选择相应的purge功能，或手动操作（参考仪器说明书），通常每个通道单独进行，直至流出液连续无气泡。

3.启动泵运行：调用已编辑好的分析方法，启动泵，以设定的流速输送流动相。

4.系统平衡判断：观察系统压力是否稳定（压力波动应在方法允许范围内），同时观察检测器基线。待基线平稳（噪音和漂移符合分析要求），通常需30分钟至1小时（具体时间因色谱柱和流动相