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林木原生质体瞬时转化试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.分离林木原生质体常用的酶是（）

A.淀粉酶B.纤维素酶C.蛋白酶D.脂肪酶

2.原生质体瞬时转化中，常用的转化方法是（）

A.热激法B.电穿孔法C.离心法D.透析法

3.用于悬浮培养原生质体的培养基是（）

A.MS培养基B.LB培养基C.YPD培养基D.B5培养基

4.林木原生质体转化后，检测转化是否成功通常用（）

A.荧光显微镜B.电子显微镜C.光学显微镜D.体视显微镜

5.原生质体在下列哪种溶液中易破裂（）

A.高渗溶液B.等渗溶液C.低渗溶液D.生理盐水

6.一般在什么时期采集林木叶片分离原生质体较好（）

A.休眠期B.幼嫩期C.衰老期D.成熟期

7.原生质体瞬时转化效率与（）关系不大

A.转化试剂浓度B.培养温度C.植株年龄D.转化时间

8.去除细胞壁后的细胞称为（）

A.原生质体B.原生质球C.细胞团D.愈伤组织

9.瞬时转化后外源基因表达的时间一般在（）

A.数小时到数天B.数周C.数月D.数年

10.分离原生质体时，酶解时间过长会导致（）

A.原生质体产量增加B.原生质体活性降低

C.原生质体纯度提高D.无影响

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.影响林木原生质体分离的因素有（）

A.酶的种类B.酶解时间C.温度D.叶片来源

2.原生质体瞬时转化的优点包括（）

A.快速获得表达结果B.可研究基因功能C.操作简单D.稳定遗传

3.常用的原生质体分离材料有（）

A.叶片B.茎段C.根尖D.愈伤组织

4.原生质体转化中用到的试剂有（）

A.PEGB.氯化钙C.硫酸镁D.甘油

5.检测林木原生质体瞬时转化成功的方法有（）

A.荧光定量PCRB.WesternblotC.观察报告基因表达D.测定细胞活力

6.原生质体培养过程中需要注意（）

A.无菌操作B.合适的渗透压C.充足光照D.适宜温度

7.提高原生质体瞬时转化效率的措施有（）

A.优化转化条件B.选择合适的载体C.增加原生质体浓度D.延长转化时间

8.原生质体在生物技术中的应用包括（）

A.基因编辑B.体细胞杂交C.植物克隆D.制备疫苗

9.以下哪些是原生质体瞬时转化可能面临的问题（）

A.转化效率低B.基因沉默C.原生质体活性差D.操作复杂

10.分离原生质体时，酶解体系通常包含（）

A.酶B.渗透压调节剂C.缓冲液D.抗生素

三、判断题（每题2分，共10题）

1.所有林木的原生质体都可以用相同方法分离。（）

2.原生质体瞬时转化后基因能稳定整合到基因组中。（）

3.高渗溶液有利于原生质体的存活。（）

4.转化试剂浓度越高，原生质体转化效率一定越高。（）

5.幼嫩叶片比成熟叶片更适合分离原生质体。（）

6.原生质体瞬时转化不需要载体。（）

7.光学显微镜可直接观察到原生质体是否成功转化外源基因。（）

8.原生质体培养时不需要添加植物激素。（）

9.不同林木原生质体的最适转化条件可能不同。（）

10.分离原生质体时，酶解时间越短越好。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述分离林木原生质体的基本步骤。

答：选取合适的林木材料（如幼嫩叶片等），消毒后切成小块，放入含酶解液（纤维素酶等）的体系中，在适宜温度、转速下酶解，然后通过过滤、离心等步骤收集纯化原生质体。

2.原生质体瞬时转化有什么应用价值？

答：可快速研究基因功能，通过导入外源基因观察其表达及功能变化；还能用于研究基因调控机制等，为林木遗传改良等提供理论和技术支持。

3.列举两种检测原生质体瞬时转化成功的方法及原理。

答：一是观察报告基因表达，若转化成功，报告基因会表达出相应产物，如荧光蛋白可通过荧光显微镜观察；二是荧光定量PCR，通过检测外源基因的转录水平判断转化情况，原理是特定引物扩增外源基因，依荧光信号定量。

4.简要说明原生质体培养过程中的关键要点。

答：关键要点有严格无菌操作，防止污染；维持合适渗透压，保证原生质体形态和活性；控制培养温度、光照等条件，同时选择合适的培养基并适时添加必要