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第三章酶的生物合成与发酵生产;一、酶生物合成的调节
;1、RNA的生物合成——转录;;;(二)酶生物合成的调节;2、酶合成的阻遏;3、分解代谢物阻遏作用
葡萄糖阻遏?-半乳糖苷酶的生物合成;
果糖阻遏a-淀粉酶的生物合成
;4、控制方法
条件控制
(1)添加诱导物
4类诱导物1)酶的作用底物2)酶作用底物的前体
3)酶的反应产物4)底物类似物
(2)降低阻遏物浓度
分解代谢物阻遏与解除:
终产物阻遏与解除:
(3)促进分泌:表面活性剂
(4)添加产酶促进剂:;遗传控制
(1)改良菌种诱变育种、原生质体融合、杂交育种、代谢控制育种等。
(2)基因工程育种;二、酶发酵动力学
;二、酶发酵动力学
;(1)生长偶联型又称同步生长型。细胞进入生长期,酶即开始大量合成;细胞进入平衡期后,酶的合成随之停止。其生物合成可以诱导,但不受分解代谢物阻遏和终产物阻遏。当除去诱导物或细胞进入平衡期后,酶的合成立即停止。其所对应的mRNA很不稳定。
(2)非生长偶联型又称滞后合成型。只有当细胞生长进入平衡期后,酶才开始合成并大量积累。其生物合成受分解代谢物阻遏。该酶所对应的mRNA稳定性好。如多数水解酶类。
(3)部分生长偶联型又称延续合成型。酶的合成与细胞同步开始,细胞生长进入平衡期后,酶还可以继续合成。其生物合成可以诱导,但不受分解代谢物阻遏和终产物阻遏。该酶所对应的mRNA很稳定。酶生产中最理想的生物合成模式。
;浓度;影响酶生物合成模式的因素主要是mRNA和培养基中存在的阻遏物:mRNA稳定性高的,可以在细胞停止生长后继续合成相应的酶;mRNA稳定性差的,随着细胞生长停止而终止酶的合成;不受阻遏物阻遏的,可随着细胞生长而开始酶的合成;受阻遏物阻遏的,要在细胞生长一段时间或进入稳定期后解除阻遏,才能开始酶的合成。
在酶的工业生产中,为了提高酶产率和缩短发酵周期,最理想的酶合成模式是延续合成型;对于其它类型的酶,要在菌种选育和工艺条件上加以调节;对于同步合成型,尽量提高mRNA的稳定性,如降低发酵温度;对于滞后合成型,尽量减少阻遏物;对于中期合成型,要从提高mRNA稳定性和解除阻遏两方面进行。;三、酶发酵生产的工艺控制;酶工程的基本过程图解;????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????
;发酵罐示意图;;
试管菌种培养
茄子瓶菌种培养摇瓶菌种培养
孢子(菌体)悬液制备
种子罐菌种培养
发酵罐发酵
发酵液预处理
酶的分离纯化精制
图3.21酶发酵生产的一般工艺流程;5、发酵工艺条件控制
(1)温度对发酵的影响
1)发酵温度的影响
2)影响发酵温度变化的因素发酵热(Q发酵)
产热因素:生物热(Q生物)、搅拌热(Q搅拌)
散热因素:蒸发热(Q蒸发)、辐射热(Q辐射)、显热(Q显热)
3)最适温度的选择与控制
选择:产酶最适温度与生长最适温度不同。
控制:夹套、蛇管、排管、喷淋管等热交换装置。;(2)pH的影响及其控制
1)pH对发酵的影响
2)影响pH变化的因素培养基营养成分与细胞代谢影响pH的变化。
3)发酵pH的确定与控制
发酵pH的确定:单因素实验摸索方法(P123)。
pH的控制:基础培养基配方、补料;3、溶氧的影响与控制
(1)溶氧的影响每小时1m3培养液中需要的氧是溶解氧量的750倍。
(2)溶氧浓度的控制
1)从供氧方面考虑dC/dt=Kla*(C*-C)
提高氧分压;增加通气量;延长气液接触时间;增加气液比表面积;改变培养液的性质。
2)从需氧方面考虑r=Qo2*Cc
;;1、诱导,阻遏,反馈阻遏作用,末端代谢物阻遏,酶生物合成模式
2、酶诱导与阻遏例子。
3、控制酶的生物合成方法有哪些?你能举例说明吗?
4、酶生物合成的四类诱导物?
5、酶生物合成存在不同模式的主要原因是什么?为什么?掌握酶生物合成的模式对生产有什么意义?
6、比较酶生物合成
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