枯草芽孢杆菌优化表达蛋白质谷氨酰胺酶的研究.pdfVIP

第55卷第4期东北农业大学学报55(4):13~21

2024年4月JournalofNortheastAgriculturalUniversityApril2024

枯草芽孢杆菌优化表达蛋白质谷氨酰胺酶的研究

王新秀，尹航，邢天悦，刘紫薇，吴思，张会，李杰，双宝*

（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030）

摘要：蛋白质谷氨酰胺酶（Protein-glutaminase，PG）作用于大分子蛋白质或其小侧链的谷氨酰胺，使其脱

酰胺变成谷氨酸可提高蛋白质溶解性和乳化性，在食品行业应用广泛。PG来源于解朊金黄杆菌（Chryseobacterium

proteolyticum），但原始解脘金黄杆菌菌株表达PG产量较低。为提高蛋白质谷氨酰胺酶表达水平，将来源于解朊金

黄杆菌的蛋白质谷氨酰胺酶基因优化密码子，将密码子换成枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）偏爱密码子，再将密码

子优化前后的PG基因分别连接至表达载体pBSA43，最后转化到枯草芽孢杆菌WB600中进行高效表达。结果显

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示，密码子优化前重组菌株的PG酶活力为1.83U·mL，优化后重组菌株的PG酶活力为2.91U·mL。为进一步提

高PG表达水平，经响应面分析优化后，确定最佳发酵条件：发酵时间为62.3h，发酵温度为32.5℃，培养基初始

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pH为7.24。在该条件下，密码子优化后重组菌株PG酶活力为5.76U·mL。来源于解朊金黄杆菌的蛋白质谷氨酰

胺酶基因经密码子优化后，表达水平明显提高，为蛋白质谷氨酰胺酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达提供参考。

关键词：密码子优化；枯草芽孢杆菌；蛋白质谷氨酰胺酶；异源表达；响应面分析

中图分类号：Q786文献标志码：A文章编号：1005-9369（2024）04-0013-09

王新秀,尹航,邢天悦,等.枯草芽孢杆菌优化表达蛋白质谷氨酰胺酶的研究[J].东北农业大学学报,2024,55(4):13-21.DOI：

10.19720/ki.issn.1005-9369.2024.04.002.

WangXinxiu,YinHang,XingTianyue,etal.StudyonoptimalexpressionofproteinglutaminaseinBacillussubtilis[J].Journal

ofNortheastAgriculturalUniversity,2024,55(4):13-21.(inChinesewithEnglishabstract)DOI：10.19720/ki.issn.1005-

9369.2024.04.002.

StudyonoptimalexpressionofproteinglutaminaseinBacillussubtilis/

WANGXinxiu,YINHang,XINGTianyue,LIUZiwei,WUSi,ZHANGHui,LIJie,SHUANGBao

(SchoolofLifeSciences,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China)

Abstract:Protein-glutaminase