1血清免疫球蛋白IgG提取.pptVIP

盐析法纯化血清中IgG类抗体

实验目的

掌握盐析法提取血清免疫球蛋白IgG抗体的原理

熟悉血清IgG提取纯化操作过程和方法

二、实验原理

蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，它在一定浓度的中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。

透析法脱盐:

透析是将含有小分子杂质的蛋白质溶液装在半透膜（玻璃纸、火绵纸等）制的透析袋里放在透析缓冲液中进行，可不断更换缓冲液，直至杂质被除去

四、操作步骤

五、结果判断

分别测OD280和OD260处的光密度值，按照公式计算

蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280—0.74OD260

IgG正常参考值：8．00～16．00g／L

效价可用免疫双扩散试验判断；

特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察；

浓度也可通过免疫浊度法等检测。

六、注意事项

盐的饱和度：影响盐析的重要因素，不同蛋白质的盐析要求盐的饱和度不同

pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小越易沉淀析出。

蛋白质浓度：越大越易沉淀，使用盐的饱和度的极限愈低。过高也易引起其他杂蛋白共沉。

温度：一般可在室温下进行，某些对热特别敏感的酶，则宜低温。

脱盐：透析时间较长，常在低温下进行，并加入防腐剂避免变性或微生物的污染。

饱和硫酸铵溶液的滴加方式：逐滴，搅拌

盐析后放置时间、离心操作的速度、时间

透析袋的使用