大豆GmNF-YA3与GmWRKY39启动子结合特异性分析.pdfVIP

大豆科学ＳｏｙｂｅａｎＳｃｉｅｎｃｅ２０２５ꎬ４４(３):０２０￣０２６

ｈｔｔｐ://ｄｄｋｘ.ｈａａｓｅｐ.ｃｎＤＯＩ:１０.１１８６１/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣９８４１.２０２５.０３.００２０

大豆ＧｍＮＦ￣ＹＡ３与ＧｍＷＲＫＹ３９启动子结合特异性分析

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高歌ꎬ孙睿加ꎬ于月华ꎬ倪志勇

(１.新疆农业大学生命科学学院/新疆极端环境生物生态适应与进化重点实验室ꎬ新疆乌鲁木齐８３００５ꎻ２.新疆农业大学农学院ꎬ新疆

乌鲁木齐８３００５２)

摘要:为探究ＧｍＮＦ￣ＹＡ３的抗旱作用机理ꎬ本研究对ＧｍＮＦ￣ＹＡ３与ＧｍＷＲＫＹ３９基因是否存在靶向作用关系进行了

分析ꎮ利用在线网站对已克隆的ＧｍＷＲＫＹ３９基因启动子序列进行生物信息学分析ꎬ将ＧｍＷＲＫＹ３９上游２０００ｂｐ启动

子连接到ｐＨｉｓ２和ｐＧｒｅｅｎⅡ０８００￣ＬＵＣ载体上ꎬ将ＧｍＮＦ￣ＹＡ３基因的开放阅读框(ＯＲＦ)构建到ｐＧＡＤＴ７和ｐＧｒｅｅｎⅡ６２￣

ＳＫ载体上ꎮ利用酵母单杂交实验与双荧光素酶实验ꎬ鉴定并验证了ＧｍＮＦ￣ＹＡ３的下游调控靶基因ꎮ生物信息学分

析结果表明ＧｍＷＲＫＹ３９启动子片段含有６个ＣＣＡＡＴ￣ｂｏｘ元件和必备核心保守元件ＣＡＡＴ￣ｂｏｘ和ＴＡＴＡ￣ｂｏｘꎬ含有２种

与植物激素反应相关的顺式元件ꎬ９种与光响应相关的顺式元件等ꎮ酵母单杂交实验和双荧光素酶实验结果表明

ＧｍＮＦ￣ＹＡ３在体外和体内均能够结合ＧｍＷＲＫＹ３９启动子ꎬ并且增强ＧｍＷＲＫＹ３９启动子的活性ꎮ结果证明ＧｍＮＦ￣ＹＡ３

可以转录激活大豆ＧｍＷＲＫＹ３９表达ꎮ研究为探究大豆ＧｍＮＦ￣ＹＡ３响应干旱胁迫的分子机制奠定基础ꎮ

关键词:核转录因子ꎻＧｍＮＦ￣ＹＡꎻ双荧光素酶ꎻ酵母单杂ꎻ下游靶基因

ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＢｉｎｄｉｎｇＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆＳｏｙｂｅａｎＧｍＮＦ￣ＹＡ３ｔｏｔｈｅＧｍＷＲＫＹ３９

Ｐｒｏｍｏｔｅｒ

１２２∗１∗

ＧＡＯＧｅꎬＳＵＮＲｕｉｊｉａꎬＹＵＹｕｅｈｕａꎬＮＩＺｈｉｙｏｎｇ

(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅꎬＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ/ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｄａｐｔａｔｉｏｎａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆＥｘｔｒｅｍｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｉｎＸｉｎｊｉａｎｇꎬ

Ｕｒｕｍｑｉ８３００５ꎬＸｉｎｊｉａｎｇꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＵｒｕｍｑｉ８３００５ꎬＸｉｎｊｉａｎｇꎬＣｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｄｒｏｕｇｈｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＧｍＮＦ￣ＹＡ３ꎬｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｎａｌｙｚｅｄｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｒｅｗａｓａ

ｔａｒｇｅｔｉｎｇｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＧｍＮＦ￣ＹＡ３ａｎｄＧｍＷＲＫＹ３９ｇｅｎｅ.Ｗｅａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｃｌｏｎｅｄ

ＧｍＷＲＫＹ３９ｇｅｎｅｂｙｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓ.Ｔｈｅ２０００ｂｐｐｒｏｍｏｔｅｒｕｐｓｔｒｅａｍｏｆＧｍＷＲＫＹ３９ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｏｎｔｏｔｈｅｐＨｉｓ２

ａｎｄｐＧｒｅｅｎⅡ０８００￣ＬＵＣｖｅｃｔｏｒｓꎬａｎｄｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ(ＯＲＦ)ｏｆｔｈｅＧｍＮＦ￣ＹＡ３ｇｅｎｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅ

ｐＧＡＤＴ７ａｎｄｐＧｒｅｅｎⅡ６２￣ＳＫｖｅｃｔｏｒｓ.Ｕｓｉｎｇｔｈｅｙｅａｓｔｏｎｅ￣ｈｙｂｒｉｄａｓｓａｙａｎｄｔｈｅｄｕａｌ￣ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｓｓａｙꎬｗｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｎｄ

ｖｅｒｉｆ