莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法.pdfVIP

食品与发酵工业FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES

DOI:10.13995/ki.11-1802/ts.039515

引用格式:谢桂勉,黄莹星,林俊虹,等.莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法[J].食品与发酵工业,2024,50

(15):126-131.XIEGuimian,HUANGYingxing,LINJunhong,etal.Preparationofhighspecificityantibodyagainstmometa-

sonefuroateandenzyme-linkedimmunosorbentassaymethod[J].FoodandFermentationIndustries,2024,50(15):126-131.

莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法

1112,3∗

谢桂勉,黄莹星,林俊虹,张世伟

1(揭阳职业技术学院,广东揭阳,522000)2(深圳市计量质量检测研究院,广东深圳,518000)

3(国家市场监管技术创新中心(智能光电传感),广东深圳,518000)

摘要莫米松糠酸酯(mometasonefuroate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情

况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯

(mometasonedifuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得

全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该

抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源

包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC)为1.2ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为

50

0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回

收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。

关键词糖皮质激素;莫米松糠酸酯;单克隆抗体;异源包被;间接竞争酶联免疫检测法(ic-ELISA)

糖皮质激素是一类甾体药物家族,有着相似的化被广泛应用于糖皮质激素的风险监控[12-13]。然而目

学结构、功效和副作用。因其具有抗炎、抗过敏作用,前未见MF免疫学检测方法的相关报道,并且由于糖

并且能促进动物生长,常被滥用于经济动物养殖皮质激素各种药物之间结构差异较小,现有的糖皮质

中[1-2]。鉴于长期食用糖皮质激素残留的食物可能激素抗体存在明显的交叉识别,特异性不足。为准确

导致人体代谢功能异常、骨质疏松,影响发育等问监控动物养殖环节中MF的滥用情况,本研究利用

题[3-5],联合国粮食及农业组织、世界卫生组织和欧MF的五元环上同时含有糠酸酯和氯丙酮2条支链

盟等均对食品中糖皮质激素残留制定了限量标准。而有别于其他64种糖皮质激素的特征,设计半抗原

GB31650—2019《食品安全国家标准食品中兽药最和全抗原,通过动物免疫、细胞融合等过程获得高特

大残留限量》也对动物源性食品中地塞米松和倍他异性单克隆抗体,并建立基于异源包被的MF间接竞

米松2种糖皮质激素残留限量进行了规定。其中地塞争酶联免疫检测方法(indirectco