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Myllykangas等人.BMCBiotechnology2011,11:122

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通过组环化进行靶向

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SamuelMyllykangas,GeorgesNatsoulis,JohnMBell和HanleePJi,2*

背景：对于下一代，我们开发了一种快速且简便的方法来靶向内容的。目前用

于下一代靶向的方案费时费力，需要大量的起始材料，并且在必要时对进行PCR扩

增时容易产生人工产物。通常，靶向NGS的样品是一个两步过程：（1）选择性捕获所需区域，（2）

修饰分子的末端以使其适用于任何给定的NGS平台。

结果：在此概念验证研究中，我们提出了一种整合方法，将这两个独立步骤合并为一个步骤。我们的方法

包括对特定组分子进行环化，直接整合在单次检测中进序所需的全部组件，并且只需要一次

PCR扩增步骤。我们还表明，可以靶向并组的特定区域而无需任何PCR扩增。

结论：我们预计这些快速靶向将有助于变异的验证，并可能具有诊断应用价值。

背景目标重已被证明在大量应用中非常有用，包括

下一代（NGS）通过使人们能够常规地验证来自全组的变异，研究疾病相关子集

组（无论是整个组还是特定子集）彻底改变以及临床可操作变异的诊断检测。基于这些应用，多种

了遗传学。NGS技术需要复杂的样品步骤，包括用于富集组特定区域的方法已被开发出来。这些方

将仪特异性的接头添加到组片段上。法包括杂交捕获（hybridselection）、多重PCR（

通常通过执行组片段化、一系列分子生物学multiplex‑PCR）和靶向环化（targeted

反应（末端修复、A尾添加、接头连接，大多数情况下circularization）方法。杂交捕获方法使用固定在微

还需要PCR）以及后续的分离步骤和纯化步骤来阵列[5‑7]或磁珠[8]上的寡核苷酸，用于从经过修饰

创建“”。例如，IlluminaGenome的样本中富集组靶标。在多重PCR[9],中，

Analyzer使用部分互补的双链接头，用于PCR扩复杂的引物组可以选择性扩增靶向区域，然后再对

增并将通用组件整合到片段中[1]。多个研究进序的修饰。，微滴技术[10]

团队已致力于简化该过程并减少NGS对扩增步骤被有效地用于并行化单个PCR反应。分子倒置探针（

的需求[2‑4]。Molecularinversionprobes）通过靶标的聚合

酶延伸和连接反应实现环化，从而实现高度多重的目标

重11,12]。靶向组环化技术通过使用溶液

中的捕获寡核苷酸将目标片段转化为环状结构，

从而直接捕获组靶标的一条链[13]。，