保健食品中免疫球蛋白 IgG 的测定.pdfVIP

保健食品中免疫球蛋白IgG的测定

1范围

本文件描述了保健食品中免疫球蛋白IgG的测定方法。

本文件第一法适用于保健食品中免疫球蛋白IgG的测定。

本文件第二法适用于保健食品中免疫球蛋白IgG单体的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

A

A

第一法高效液相色谱法

4原理

试样经磷酸盐缓冲溶液超声提取、低温离心处理后，根据高效亲和色谱原理，使目标物通过磷酸盐

缓冲溶液与蛋白G柱结合，经盐酸氯化钠水溶液洗脱后，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1试剂

5.1.1水，按GB/T6682规定的一级水

5.1.250mmol/L磷酸盐缓冲溶液：称取14.68g十二水合磷酸氢二钠（相当于41mmol磷酸氢二钠）

和1.40g二水合磷酸二氢钠（相当于9mmol磷酸二氢钠），用水溶解并定容至1L，用磷酸调节pH值

为7.4-7.5。

5.1.312mmol/L盐酸氯化钠水溶液：称取氯化钠2.92g，加入0.5mL浓盐酸（优级纯），再加水定

容至0.5L。

5.1.450mmol/L磷酸盐与0.5mol/L氯化钠缓冲溶液：称取7.34g十二水合磷酸氢二钠和0.70g二水合

磷酸二氢钠，同时加入14.61g氯化钠，用水定容至0.5L，过水系滤膜、脱气后上机使用。

1

注1：不同水合度磷酸盐，摩尔质量不同，称样量需做适当调整。

5.2标准物质或标准样品

免疫球蛋白IgG标准品（来自牛血清或牛乳），纯度≥90%，或经国家认证并授予证书的标准物质

或标准样品。

5.3标准溶液配制

5.3.1标准储备溶液（1.0mg/mL）：准确称取10mg（精确至0.01mg）免疫球蛋白IgG标准品，用

50mmol/L磷酸盐缓冲溶液溶解并定容至10mL，于4℃冰箱中保存，保质期1个月。

5.3.2标准系列工作溶液：分别准确吸取不同体积的标准储备溶液，用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液配

制成浓度分别为0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL的标准工作

溶液。临用现配。

5.4材料

5.4.1聚醚砜滤膜：0.45µm，用于样品过滤。

5.4.2水相微孔滤膜：0.45μm，用于流动相过滤。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或相当者。

6.2分析天平：感量为0.01mg。

6.3pH计：精度为0.01。

6.4超声波清洗器。

6.5涡旋振荡器。

6.6低温冷冻离心机，转速≥10000r/min。

7分析步骤

7.1试样制备

7.1.1片剂：取不少于20片或不低于10g样品，经研钵磨成粉状，封存备用。

7.1.2粉剂：取不少于10g样品，混匀后，封存备用。

7.1.3硬胶囊：取不少于20粒或不低于10g样品，取其内容物，混匀，封存备用。

注2：免疫球蛋白IgG受热后极易变性，在试样制备时，注意温度应控制在50℃以下。由于粉碎机粉碎样品时会产生

高温，可能导致免疫球蛋白变性，所以必要时用研钵将样品研细。

7.2试样处理

2

称取约0.1g-1.0g试样，加入适量5