小动物眼底照相数据采集操作规范指南（2025）PPT课件.pptxVIP

小动物眼底照相数据采集操作规范指南（2025）精准操作，规范采集

目录第一章第二章第三章设备准备与校准动物准备流程标准操作步骤

目录第四章第五章第六章数据质量控制设备清洁维护文档记录要求

设备准备与校准1.

眼底相机镜头调试要求使用标准校准板调整镜头焦距，确保成像清晰度误差≤5μm，需在每次实验前进行验证。焦距校准根据动物瞳孔直径（建议2-4mm范围）设置适宜照明强度，避免视网膜光损伤（安全阈值≤1500lux）。光源强度调节依据研究需求选择绿光（540-580nm）或红外光（790-850nm）滤光片，确保血管对比度达20%以上。滤光片匹配

设置亮度为1500-2000lux（啮齿类动物安全阈值），曝光时间≤20ms以避免视网膜光损伤，同时保证信噪比＞30dB。白光强度控制荧光素血管造影采用485nm激发滤光片，发射波段530-550nm，功率密度严格控制在5mW/cm2以下。荧光激发光谱850nm近红外光源用于无创深层血管观察，需关闭所有可见光源并启用冷却型CCD（工作温度-70℃）抑制热噪声。红外成像模式当切换明场/荧光/红外模式时，系统自动保存当前参数预设，避免重复设置导致的时间误差。多模态同步光源参数标准设置

使用USAF1951分辨率靶标进行MTF验证，要求中心区域分辨率≥200lp/mm（对应小鼠视网膜4μm特征结构识别）。光学性能测试每日开机后运行Fourier频谱分析（0-100Hz频段），确保环境振动幅度＜1μm，异常振动需触发自动锁定机制。振动检测实验舱维持22℃±1℃恒温，湿度40%-60%，温控系统每30分钟记录数据并生成校准曲线。温湿度验证设备稳定性检查流程

动物准备流程2.

麻醉与体位固定标准麻醉剂选择与剂量控制：使用异氟烷或氯胺酮-赛拉嗪复合麻醉，剂量需根据动物体重精确计算（如异氟烷诱导浓度3-5%，维持浓度1-2%），避免呼吸抑制。体位固定技术要求：采用专用动物固定架，确保头部呈45°倾斜角，使用无菌胶带固定四肢，保持角膜与镜头轴线垂直，避免眼睑遮挡。生命体征监测规范：全程监测心率（维持120-180次/分）、血氧饱和度（≥95%）和体温（37±0.5℃），配备急救用阿托品和肾上腺素。

散瞳药物选择采用0.5%托吡卡胺与2.5%去氧肾上腺素复合滴眼液，每3分钟滴注1次，连续3次，确保瞳孔直径≥4mm且对光反射消失散瞳时间控制从首次给药到开始照相需间隔15±2分钟，超过30分钟需补滴1次药物，避免因药物代谢导致的瞳孔回缩影响成像质量角膜保护措施散瞳期间使用无菌聚乙烯薄膜覆盖角膜，配合人工泪液（0.3%透明质酸钠）每5分钟滴注1次，防止角膜干燥混浊异常瞳孔处理如遇虹膜后粘连，采用1%阿托品凝胶穹窿部注射，配合前房穿刺术分离粘连，术后立即用平衡盐溶液冲洗前房瞳孔处理操作规范

角膜保湿操作步骤使用无防腐剂羧甲基纤维素钠（0.5%）与右旋糖酐70（0.1%）复方制剂，每3分钟滴注1次，维持角膜透明度＞90%保湿剂选择操作环境湿度保持60±5%，温度25±1℃，配备HEPA过滤系统减少空气流动导致的角膜水分蒸发环境参数控制采用裂隙灯显微镜每10分钟检查1次角膜上皮完整性，出现＞2mm2干燥斑需立即停止操作并涂抹重组人表皮生长因子凝胶术中评估标准

标准操作步骤3.

确保图像清晰度通过调整显微镜焦距和照明强度，使视网膜血管层清晰可见，避免因离焦导致血管边界模糊或细节丢失，影响后续定量分析。以视神经乳头或主要血管分支为解剖标志，统一拍摄中心位置，减少因定位差异引起的图像偏移，保证多时间点数据可比性。使用定制化固定装置维持小动物头部稳定，避免因呼吸或运动伪影干扰成像质量，需配合麻醉深度监测以确保安全性。标准化定位基准优化动物体位固定初始对焦与定位方法

基础白光成像先获取无滤光片的全视网膜广角图像，用于评估整体结构（如出血、渗出等病变），曝光时间控制在10-20ms以避免过曝。荧光素血管造影协议静脉注射荧光素钠后，按预设时间点（如0/30/60/120秒）连续拍摄，使用488nm激发滤光片和520nm发射滤光片，单次曝光不超过50ms以减少光毒性。多模态图像配准同步采集红外反射成像（IR）和自发荧光（AF）图像，通过软件对齐功能确保不同模态图像的空间一致性，便于后期血管形态与功能关联分析。标准成像序列执行

设备故障应对成像系统报错：立即保存已采集数据并重启软件，检查相机连接与电源状态；若硬件异常（如滤光片卡死），切换备用通道并记录故障参数供后续校准。照明不稳定：关闭光源冷却5分钟后重新校准强度，排除环境光干扰或灯泡老化因素，必要时更换备用光源模块。动物状态异常麻醉过深或过浅：暂停拍摄并调整异氟烷浓度，监测心率与血氧饱和度，若出现呼吸抑制需立即终止实验并给予急救措施（如供氧）。荧光素过敏反应：表现为抽搐或皮肤红斑时，