流式细胞术常见实验分析课件.pptVIP

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2026-01-04 发布于北京
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流式细胞术常见实验分析课件.ppt

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1.Guavaeasycyte8HT操作流程

2.四种常见流式细胞术;1.Guavaeasycyte8HT操作流程

——Incyte模块;1.1清洗;1.2样本采集;1.3分析

见具体实验的分析。

1.4关机;1.5日常维护;微珠：10μL（用前震荡混匀）

Buffer：190μL;2.四种常见流式细胞术;凋亡启动;2.1.1PI单染法;优缺点：;2.1.2Annexin-Ⅴ-PI双染法;结果分析;荧光交叠;荧光补偿;优缺点：;2.1.3线粒体膜电位法;结果分析;2.2DNA含量检测与周期分析;2.2.1DNA倍体分析——PI染色法;结果分析

——Guava原软件分析;在用第三方软件分析之前，请将流式结果按如下所示导出。;结果分析

——Modfit软件分析;结果分析

——Modfit软件分析;图片拷贝：直接Ctrl+C;结果分析

——Flowjo软件分析;2.2.2S期特异性检测;2.2.3M期特异性检测;2.3胞内活性氧水平的检测与分析;注意事项：;（1）阴性细胞群（峰）和阳性细胞群（峰）分群明显

;（2）样本管与阴性对照管峰形重叠

;样本管峰形整体右移。在排除非特异性染色的情况下（如设置严格的对照、调节抗体浓度等），方能进行分析。

分析原则：

不可根据阴性对照界定阴性置信区；

可记录平均荧光强度，不可记录阳性细胞百分率。;（3）同时出现弱阳性峰与强阳性峰的组合图形

;2.4细胞表面分子的检测与分析;2.4.1免疫学检测;数据分析;2.4.2肿瘤干细胞分析;MCF-7negativecontrol MCF-7CD24 MCF-7CD44 MCF-7CD24/CD44;侧群细胞;细胞周期特异性凋亡检测：AnnexinⅤ染色后用透膜固定剂固定，然后加入PI进行DNA染色。;报告基因与细胞周期结合;报告基因与细胞凋亡结合;ROS与细胞活性结合——DCFH/PI染色法;干细胞分析与细胞活性结合——表面标志物抗体/PI染色法;谢谢大家！