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医学检验科标准操作程序和技术操作规范培训考核及答案

临床血液学检验标准操作程序：样本采集使用EDTA-K2抗凝管，采血量2-2.5ml，采集后立即颠倒混匀8-10次，避免剧烈震荡导致血小板聚集。样本应在2小时内完成检测，室温下保存不超过4小时，冷藏（4℃）保存不超过24小时但需复温至室温后检测。仪器开机需进行每日校准，使用配套校准品，校准前检查试剂液位、管路通畅性及废液量。检测时先做空白对照，确保仪器基线稳定。白细胞分类时，镜检血涂片需采用推片法，血膜长度占载玻片3/4，头体尾清晰，体尾交界处细胞分布均匀，油镜下分类200个白细胞，记录各细胞比例及形态异常（如中毒颗粒、空泡变性）。血小板计数异常时需观察血涂片血小板分布，若出现聚集现象需重新采集枸橼酸钠抗凝样本复查。

临床化学检验技术操作规范：血清分离需在采血后30分钟内离心，转速3000rpm，时间10分钟，分离后血清需避免溶血（血红蛋白＞0.2g/L会干扰胆红素、LDH等项目）。生化分析仪每日开机需进行两点定标（校准品浓度涵盖检测范围），校准后检测质控品（高、中、低水平），要求质控值在靶值±2SD内，若失控需立即查找原因（试剂失效、校准错误、仪器故障），处理后重新检测并记录。酶类项目（如ALT、AST）检测时需控制反应温度37±0.1℃，比色杯光径1cm，波长准确性误差≤1nm。血脂检测前患者需空腹12小时，避免饮酒（影响甘油三酯），样本避免脂血（乳糜微粒＞1.7mmol/L需高速离心去脂）。电解质检测使用血清或肝素锂抗凝血浆，避免使用EDTA抗凝（影响钙、镁），检测后需进行电极斜率校准（Na+斜率90-110mV/decade，K+50-60mV/decade）。

临床免疫学检验标准操作：ELISA检测需使用同一批号试剂，试剂盒平衡至室温（20-25℃）后使用。加样时采用移液器（校准周期6个月），加样体积误差≤±2%，样本和试剂避免气泡。温育条件严格按说明书（37℃孵育需用恒温箱，湿度＞80%；室温孵育需避免阳光直射），温育时间误差≤±5分钟。洗板时使用自动洗板机，洗液量每孔350μl，洗板5次，最后一次拍干孔内液体。显色剂（TMB）需避光保存，显色时间15分钟（避光），终止液（2MH2SO4）加入后15分钟内完成比色。化学发光检测需检查仪器注射器堵塞（用去离子水冲洗3次），磁珠混悬液使用前摇匀（30秒），样本加样后反应杯需无残留液体（用吸水纸擦拭杯口）。自身抗体检测（如抗核抗体）需使用HEp-2细胞片，滴加血清（1:100稀释）后湿盒孵育30分钟，荧光二抗孵育后用PBS洗3次（每次5分钟），封片后2小时内镜检（荧光显微镜激发光波长495nm，发射光515nm）。

微生物学检验技术规范：血培养采集需在患者寒战或发热初期（体温＞38℃），严格皮肤消毒（75%酒精擦拭2遍，碘酊作用1分钟后脱碘），成人采血量10-20ml（需氧瓶8-10ml，厌氧瓶5-8ml），儿童1-5ml（根据年龄调整）。培养基制备需记录高压灭菌参数（121℃，15分钟），倾注平板时温度45-50℃，厚度3-4mm（90mm平板约15ml），斜面培养基长度占试管2/3。细菌鉴定时革兰染色需注意结晶紫染色1分钟，碘液媒染1分钟，95%酒精脱色10-30秒（至无紫色脱落），沙黄复染30秒。苛养菌（如肺炎链球菌）需在5%CO2环境中培养（35℃，48小时），培养基添加5%羊血和X、V因子。药敏试验采用MH琼脂（pH7.2-7.4，厚度4mm），菌悬液浓度0.5麦氏单位（1.5×10^8CFU/ml），接种后15分钟内贴药敏纸片（纸片间距≥24mm，距边缘≥15mm），35℃培养16-18小时（肠杆菌科）或24小时（葡萄球菌），测量抑菌圈直径时使用游标卡尺（误差≤0.5mm）。

分子生物学检验操作程序：核酸提取使用磁珠法时，样本裂解液（含蛋白酶K）需56℃孵育10分钟（病毒核酸）或37℃孵育30分钟（细菌核酸），磁珠结合时间5分钟（震荡混匀），洗涤液（75%乙醇）洗涤2次（每次1分钟），最后用50μl洗脱缓冲液（65℃预热）洗脱5分钟。PCR扩增体系配置需在专用洁净区（PCR实验室分区：试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区，单向气流），引物终浓度0.2-0.5μM，dNTP浓度200μM，Taq酶用量1-2U/反应。扩增程序：预变性95℃5分钟，变性95℃30秒，退火（根据引物Tm值调整，通常55-60℃）30秒，延伸72℃30秒（1kb以下片段），循环35次，最后延伸72℃5分钟。结果判读时需设置阳性对照（已知阳性样本）、阴性对照（无模板水）、内参（β-actin或GAPDH），Ct值≤35为阳性（需排除污染），Ct值35-40需重复检测，＞40为阴性。

培训内容：理论培训包括各专业SOP核心步骤（如血