微生物工程与发酵.pptVIP

微生物制药与发酵;1.发酵的定义和种类;1.2发酵的种类：

1.2.1微生物菌体发酵

微生物菌体发酵是以获得微生物菌体为目的，如：面包的酵母发酵、单细胞蛋白发酵（利用各种碳源）、真菌类（各种蘑菇、冬虫夏草）、生物防治剂（苏云金杆菌，伴孢晶体可以毒杀鳞翅目、双翅目害虫）。;

1.2.2微生物酶发酵

微生物酶发酵是以获得酶为目的的发酵，如青霉素酰化酶，用于半合成青霉素时，制备中间体6－氨基青霉烷酸。

1.2.3微生物代谢产物发酵

①初级代谢产物：氨基酸，核苷酸，维生素，有机酸。

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②次级代谢产物：最主要的是抗生素。

1.2.4微生物转化发酵

利用微生物的一种或多种酶把一种化合物转变为结构相关的更有价值的产物的生化反应为转化发酵。

;放线菌素类（放线菌素D）大环内酯类（红霉素、螺旋霉素、柱晶白霉素）和多烯大环内酯类（制霉菌素、抗滴虫霉素等）。酸性、碱性和中性，但以碱性为多。

2.3真菌：

真菌的曲菌属产生桔霉素，青霉素菌属产生青霉素和灰黄霉素等，头孢菌属产生头孢霉素等。脂环芳香类或简单的氧杂环类，多为酸性化合物。

;3.发酵制药的基本过程;3.1菌株选育:

菌种选育使青霉素的产量由最初20单位提高到80000单位以上。优良菌种应该高产、性能稳定、容易培养。

3.2发酵:

发酵阶段包括孢子制备、种子制备、发酵培养，是生物加工工程过程。

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3.2.1孢子制备:保存的菌株，在固体培养基上，复苏，生长产生孢子。

3.2.2种子制备：将制备的孢子接到摇瓶或小发酵罐内，培养，使孢子发芽繁殖。对于大型发酵，普遍采用2次扩大培养制备种子，最后接入发酵罐。

3.2.3发酵：将种子以一定的比例接入发酵罐，培养，是生产药物的关键阶段和工序。需要通气，搅拌，维持适宜的温度和罐压。发酵一定周期。期间，取样分析，无菌检查，产量测定。加入消泡剂、酸碱控制pH，补充碳源、氮源和前体，促进产量。

;3.3分离纯化:

分离纯化阶段包括发发酵液的预处理与过滤、提取与精制、成品检验和成品包装，是化学分离工程过程。

3.3.1发酵液的预处理与过滤：使发酵液中蛋白质和杂质沉淀，增加过滤流速，使菌丝体从发酵液中分离出来。如制霉菌素、灰黄霉素、曲古霉素、球红霉素药物存在于菌丝中，要从菌体中提取。如果存在于滤液中，澄清滤液，进一步提取。;3.3.2提取与精制：吸附、沉淀、溶媒萃取、离子交换等从滤液中把药物提取出来。精制是浓缩或粗制品进一步提纯并制成产品。可重复或交叉使用四种基本方法。

3.3.3成品检验：包括性状及鉴别试验、安全试验、降压试验、热源试验、无菌试验、酸碱度试验、效价测定、水分测定等。

3.3.4成品包装：合格成品进行包装，为原料药。制剂由制剂车间或厂再分装。;4.发酵过程的主要控制参数与检测;

4.1.1温度：是指发酵中的所维持温度，是重要的参数，由温度计直接读出。温度的高低直接关系到细胞的酶活性和反应速度、培养基中的溶解氧和传递速度、菌体的生长速度和产物合成速度等。

4.1.1罐压：罐体内维持正常的压力。罐压的测定是原位传感，压力计上直接读出。发酵罐维持正压防止杂菌侵入，罐压影响CO2和O2的溶解度，压力大小对细胞本身有影响。

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4.1.2搅拌速度（r/min）：每分钟搅拌器的转动次数。影响氧等气体在发酵液中的传递速度和发酵液的均匀程度。搅拌功率（kw）影响液相体积氧传递系数

4.1.3空气流量（v/(v?min)）：每分钟单位体积发酵液内通入的空气体积，影响供氧及其他传递。由流量计直接读出。;

4.1.4料液流量（L/min）：控制流体进料的参数，用每分钟进入的体积表示。

温度计、压力计、通气量、搅拌转速（测速电机）等均是原位传感器，安装在发酵罐内，直接与发酵液接触，给出连续响应信号。

;4.2化学参数：

主要包括pH、基质浓度、溶解氧浓度、废气中氧气浓度和二氧化碳浓度、产物的浓度等。

4.2.1pH：产酸和产碱的生化反应的综合结果，与菌体生长和产物合成有关。

4.2.2基质浓度：发酵液中糖、氮、磷等营养物质的浓度。它们影响细胞生长和代谢过程，是提高产物产量的重要调控手段。;

4.2.3溶解氧浓度：氧是细胞呼吸的底物，氧浓度的变化对细胞影响很大，也反映了设备的性能。常用绝对含量表示，也可用饱和氧浓度的百分数表示。

4.2.4废气中氧气浓度和二氧化碳浓度：废气中的氧含量和细胞的摄氧率有关，二氧化碳就是细胞呼吸释放出，测定废气中的氧和二氧化碳含量可以计算出细胞的摄氧率、呼吸率和发酵罐的供氧能力。

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4.2.5产物的浓度：在发酵液中的所含目标产物的量，可以用质量表示，也可用标准单位表示。如μg/ml,U/ml等。产物量的高低反映了发酵是否正常，判断发酵周期。

pH计、溶氧电极等是原位传感测定，