01实验1-中药组织临时制片技术.pptVIP

实验一中药组织临时制片技术;[实验材料]

麦冬、黄柏粉末、鲜薄荷叶、红花、黄芪粗粉

[仪器与试剂]

生物显微镜、刀片、镊子、试管、烧杯、培养皿、水合氯醛试液、稀甘油、酒精灯、氢氧化钾。;【内容及方法】

一、徒手切片法

是最基本也是最常用的切片方法。不但操作最为简便迅速，而且制成的切片还可以保持其细胞和内含物的固有形态，便于进行各种显微化学反应。;(1)材料的制备：药材刷除干净。粗大或长形的材料应先切成适当大小的块或短段，一般以宽不超过1cm、长不超过3cm为宜，较坚硬的材料则以宽0.5cm为宜，切面应削平整。

质地软硬适中的材料可以直接进行切片，质地较坚硬的材料则须先使其软化才能切片。过于柔软的材料不便夹持切片，可将其浸入70-75％乙醇中，约20分钟后即可较硬。;(2)切片方法：用左拇指和食指夹持材料，并用中指托着，使材料略高出食、拇指，左肘关节靠在桌沿，以避免手臂及手腕的摇动。并使材料的切面保持水平。右手执切片刀(或刀片)，刀口向内并使刀刃与材料的切面平行，移动右臂使刀锋自左前方向右后方切削，切出的薄片用毛笔轻轻从刀上扫下，放在盛有蒸馏水或50％乙醇的培养皿中，即得。;注意：

食指略高于拇指和中指，在外方，其他2指在内方，靠近身体。食指上下移动可控制刀片切削材料的厚度。

切的时候刀口轻轻抵住材料，刀片由食指顶端托着,可靠在食指顶端控制切片的厚度。然后迅速拉动刀片（左前往右后方拉动）。

要求：

切片薄，且尽可能保持完整。;(3)装片：徒手切片一般多不染色，而直接封藏在适宜的试剂中，如水合氯醛液、稀甘油或显微化学试剂等。取材方法是用毛笔选取上述的已切好的完整、清晰的薄片，放于清洁的载玻片上，滴加所需试剂，盖上清洁的盖玻片即可观察。如要制成半永久性标本片。可用稀甘油洗去水合氯醛液，然后封藏在熔化了的甘油明胶中。

注意：使用显微镜前必须洗手。;二、撕取(表皮)法：

当需要观察样品材料的表皮结构特征时，可采取本法以获得较清晰的临时标本片，多用于叶类药材(全草类、花类等也可)的显微鉴定工作中。

首先将盖、载玻片擦试干净，在载玻片中央加一滴蒸馏水，然后将薄荷叶片用左手食指和中指夹好，拇指压牢，右手用镊子在叶片的上表面或下表面撕下一层极薄的表皮，这层表皮不带有叶片的绿色部分。;四、粉末制片

(1)粉末的制备：

选择具有代表性的样品适量(10-20g)置粉碎器(冲器、铁碾或其他粉碎器)中粉碎，使之一般能通过中国药典的5-6号筛(相当80-100目)为度。

注：若有较多的组织(如纤维等)通不过筛子，而作为残渣(头子)遗去，就会影响该药材的特征的检出，造成结果判断的困难。;(2)粉末制片：

即以水或稀甘油作为润湿剂，与粉末混合后制片。

方法：于载玻片上滴加润湿剂1-2滴，再用小药勺取粉末少许与润湿剂混合均匀。然后将盖玻片一侧的边沿轻轻压在粉末旁载玻片上，慢慢放下(切勿丢下，否则易,产生气泡)。盖下后若润湿剂未充满盖玻片，则可从一侧滴加少量润湿剂，使之充满盖片

若润湿剂过多而溢出盖片外，则用滤纸屑从侧面将过多的润湿剂吸去，保持制片清洁。;要求：

制片中粉末分布均匀，气泡尽量少。

粉末不能明显重叠、堆积;五、解离组织制片：

解离组织法是把木化、栓化以及角质化的组织解离开来，进行制片观察。特别常用于细胞、纤维、导管、管胞的单个细胞形状的观察以及角质化表皮的制片观察。;解离，是用化学试剂使组织中各细胞之间的胞间层溶解达到细胞分离的。

对于不同性质的药材所采用的方法不同，如药材内薄壁组织占极大部分，木化组织很少或分散存在，可用氢氧化钾法；如薄壁组织较少，木化组织较多或集合较大的群束，须用硝铬酸法或氯酸钾法。在进行组织解离前，应将药材切成不粗于火柴杆大的条状或片状。

;氢氧化钾法：将少量黄芪碎块置试管中，加5％氢氧化钾溶液适量(2-5ml)，在沸腾的水浴中加热，在用玻璃棒挤压材料能离散时为止(一般约需30分钟)。倾去碱液，用清水洗涤3-5次后，取少许在载玻片上用解剖针撕开，用稀甘油封片观察。