流式细胞术优质精品文档.pptVIP

FlowCytometryFlowCytometry流式细胞术（FlowCytometry,FCM）是一种可以快速（每秒可达1000-10000个）、准确、客观，同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选（纯度可达99%以上）。研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量。流式细胞仪原理及组成流路流动室(50-300μm大小的孔径中)鞘液SHEATH样本流SAMPLE单细胞悬液5*105~1*106个/ml光路激光光源及光束形成系统滤片光电倍增管PMT电路放大电路HV及GAIN增益、A/D转换分析系统计算机、应用软件分选系统流式细胞仪种类临床型（小型机、台式机）综合型（大型机、分析型）主要区别：综合型具有强大细胞分选功能流式细胞仪的信号分析外周全血细胞散射光双参数点图

（红细胞溶解后）流式细胞仪的信号分析流式细胞仪的信号分析FCM标记方法单标：一种单抗/tube:FL1,FSC,SSC（三参数）双标：（两种单抗/tube）：FL1,FL1,FSC,SSC（四参数）三/四标：（三种单抗/tube）（四种单抗/tube）： FL1-FL3/4,FSC,SSC流式细胞仪的信号分析荧光素种类FITC(异硫氰酸荧光素）：绿色530nmPE（藻红蛋白）：橙黄色575nmPerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色675nmPI(碘化丙啶）：橙红色APC(别藻兰蛋白）：红色660nm-630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发,发射波长670nm应用FCM检测可溶性蛋白HumanTH1/TH2CBAkitsensitivity流式技术要点标本的获取和运输标本的制备和染色单细胞悬液的制备：胰酶消化抗体或标记分子的染色：抗原抗体反应非特异结合的去除：洗涤和封闭（血清和同型抗体）仪器的校准和质控流式细胞仪数据获取与储存流式细胞术样品的制备FCM的主要应用流式分析应用细胞结构细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期蛋白质含量RNA含量CD分子—人类白细胞分化抗原20年前由于杂交瘤技术的出现,开创了制备单克隆抗体的新纪元。从此单克隆抗体（单抗）广泛应用在医学、免疫学和血液学基础和临床研究获得了巨大成就。其中最具代表性的就是利用单抗研究人类血细胞表面抗原。血细胞表面抗原是白细胞在正常分化成熟的不同阶段以及活化过程中在这些不同谱系（lineage）细胞胞浆或细胞膜表面出现或消失的标记，参与机体重要的生理和病理过程。八十年代在WHO和国际免疫学联合会(IUIS)组织下，将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个分化群以ClusterofDifferentiationmembersystem,简称CD表示。现多称为细胞膜分化抗原（包括血小板、红细胞等造血细胞和血管内皮细胞、纤维母细胞、上皮细胞等非造血细胞以及机体内广泛的细胞）。CD抗原及其相关细胞群T细胞CD2CD3CD4CD5CD7CD8CD28CD38B细胞CD10CD19CD20-CD24CD37CD72-CD75髓系细胞CD13CD14CD15-CD17CD33CD34CD35NK细胞CD16CD56CD57CD94血小板CD31CD41CD42aCD42bCD61CD62pCD63激活抗原CD26CD30CD69CD95-CD97粘附分子CD11a-cCD18CD29CD44CD49a-f内皮细胞CD105CD106CD109细胞因子受体CD25CD115CD117CD122CD126流式细胞术在医学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（一）FCM在免疫学中的应用（二）FCM在肿瘤学中的应用血液标本的检查肿瘤实体瘤标本的FCM检查肿瘤基因表达产物的检测肿瘤基因表达产物的检测肿瘤治疗细胞DNA分析原理细胞周期与DNA的倍体关系DNA分析常用名词DNA分析的临床意义DNA分析的临床意义细胞凋亡的检测和分析细胞