第5章-细胞的原代与传代培养.pptVIP

第五章

细胞的原代与传代培养;

一、原代培养

概念：取自体内新鲜组织并置于体外条

件下生长的细胞在传代之前称为

原代培养。

;原代培养技术的重要意义:

原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性，而且大多数细胞表现出原来组织的特性。

利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。

原代培养也是建立各种细胞系（株）必须经过的阶段。;贴块法;93;解离释放细胞的方法;动物细胞原代培养过程图;

方法与步骤（举例）;（4）计数与稀释：从过滤的细胞悬液中取出1ml滴于血细胞计数板上，按白细胞法进行计数；计数后用培养液稀释，稀释后的浓度一般以每毫升含30～50万个细胞为宜。

（5）分装与培养：将稀释好的细胞悬液分装于细胞培养瓶中，盖好瓶盖，在培养瓶上做好标记，置于37℃的CO2培养箱中培养。

（6）观察：逐日检查培养物是否污染，观察细胞生长情况。待细胞已基本长成致密单层时，即可进行传代培养。

;原代细胞培养结果;;二、传代细胞培养;;方法与步骤;（二）悬液细胞的传代培养

（1）取生长良好的细胞，在超净工作台用无菌吸管

把培养瓶中的细胞吹打均匀。

（2）转移到无菌的离心管中，盖紧胶盖，平衡后离

心（1000r/min）5min。

（3）在超净工作台中吸去上清液，加入适量新培养

液，用吸管吹打细胞，制成悬液。

（4）以1：2或1：3进行分装，并在培养瓶上做好标

记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37℃CO2培养

箱培养。

（5）观察：细胞培养24h后，即可进行观察。;传代细胞培养结果;(3)标本放入收集瓶后，送出手术间，立即送往组织培养实验室。工作人员最好是等在手术间外。但有时手术时间难以掌握。则请护士将收集材料的瓶子盖好后，放入4℃冰箱，尽快打电话通知工作人员。

(4)取临床标本时，虽然尽可能做到无菌操作，但仍有污染可能性的存在。可选用抗生素类控制污染。如手术标本比较大（约200mg以上），可将其浸于70%酒精中约30-60秒，这样会减少表面污染而不损坏内部组织的结构和存活。不要用纱布包裹标本，纱布纤维易粘附在组织上。

;需要注意的事项

整个取材过程中，都要注意保持组织的湿润，随时给组织块滴加一些培养液或平衡盐溶液。一般情况下，最好是使用冰冷的液体。

在剪碎或切割组织块时，尽量使用锋利的刀剪，防止以钝器对组织揉、捻、撕拉等而造成细胞损伤。

整个取材过程耗时越短越好。在万不得已的情况下，取材后也可将组织贮存在冷的(4℃)含平衡盐溶液(或其它缓冲盐溶液)的营养液中，最好不超过24～48h(视不同组织类型而定)。