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微生物学技术实验教学指导手册

绪论

微生物学是一门以实验为基础的生命科学分支。微生物学技术实验课程旨在引导学生通过亲自动手操作，掌握微生物学研究的基本方法与技能，深化对微生物世界的理性认知，培养科学思维、动手能力及创新精神。本手册作为该课程的指导性文件，系统阐述了微生物学实验的基本原理、操作规范、安全注意事项及常用技术，力求为教学活动提供清晰、严谨、实用的参考。

本手册的使用，要求学生在实验前务必认真预习相关内容，明确实验目的、原理和步骤；实验过程中应严格遵守操作规程，仔细观察，如实记录；实验后及时整理数据，分析结果，撰写实验报告。教师应根据教学大纲要求，结合本手册内容，灵活组织教学，并注重对学生实验技能的训练与科学素养的培育。

第一章实验室基本规范与安全

1.1实验室规则

微生物学实验室因其研究对象的特殊性，必须建立并严格遵守以下规则：

1.准时守纪：按时到达实验室，不迟到、早退。实验期间保持安静，专注操作，不得进行与实验无关的活动。

2.着装要求：进入实验室必须穿着实验服，长发者需将头发束起，不穿露趾鞋。实验操作时，严禁佩戴首饰、手表等易污染物品。

3.物品摆放：实验台面应保持整洁有序，实验用品按需取用，用后及时归位。个人物品（如书包、水杯）应放置于指定区域。

4.操作规范：严格按照实验指导或教师要求进行操作，不得擅自更改实验步骤或试剂用量。对不明确的操作，务必向教师询问清楚后方可进行。

5.试剂使用：仔细辨认试剂标签，防止错用。试剂取用遵循“只出不进”原则，避免污染原瓶。有毒、腐蚀性试剂的使用需在教师指导下进行。

6.废弃物处理：实验产生的废液、固体废弃物（如污染的滤纸、吸管、培养物等）必须分类倒入指定容器，严禁随意丢弃或倒入下水道。

7.仪器维护：爱护实验仪器设备，使用前检查，使用后清洁并按规定保养。如遇仪器故障，应立即停止使用并报告教师。

8.实验记录：及时、准确、完整地记录实验数据和观察现象，不得随意涂改。

9.实验结束：实验完毕，认真清洗实验器皿，整理实验台面，关闭水、电、气等开关。经教师检查同意后方可离开实验室。离开前务必洗手。

1.2实验室安全

安全是实验室工作的首要前提，必须高度重视：

1.个人防护：熟悉紧急喷淋、洗眼器、急救箱的位置和使用方法。实验时若不慎将试剂溅到皮肤或眼睛，应立即用大量清水冲洗，并及时报告教师。

2.生物安全：操作致病性微生物或未知样品时，需在生物安全柜内进行，并严格执行相应的生物安全等级防护要求。避免用手触摸口鼻眼等部位。

3.化学品安全：了解所用化学试剂的安全特性（如易燃、易爆、有毒、腐蚀等），熟知其安全数据表（SDS）相关内容。妥善保管，规范操作。

4.用电安全：不乱拉乱接电线，不超负荷用电。湿手不得触摸电器开关或插座。使用离心机等高速运转设备时，务必平衡对称放置样品，并盖好盖子。

5.消防安全：熟悉消防器材的位置和使用方法。实验室严禁吸烟，不得存放易燃易爆物品。如遇火情，保持冷静，立即采取正确的灭火措施并报告。

6.意外事故处理：发生意外事故（如割伤、烧伤、中毒等），应立即报告教师并采取初步应急措施，必要时送往医院救治。

第二章无菌操作技术

2.1无菌概念与意义

无菌操作技术是微生物学实验的核心技术，其目的是防止外界微生物污染实验材料，同时防止实验微生物扩散污染环境或操作人员。在微生物的分离、纯化、培养、鉴定及各项生理生化试验中，无菌操作是保证实验结果准确性和可靠性的关键。

2.2常用灭菌与消毒方法

1.湿热灭菌：

*高压蒸汽灭菌：适用于培养基、生理盐水、玻璃器皿、工作服等。通常条件为121℃，维持一定时间。灭菌效果可靠，是实验室最常用的灭菌方法。

*煮沸消毒：适用于饮水、餐具及某些不怕潮湿的玻璃器皿，煮沸一段时间即可。

2.干热灭菌：适用于玻璃器皿（如吸管、培养皿）、金属用具等。通常在烘箱中____℃加热一段时间。

3.紫外线消毒：适用于实验室空气、工作台面和物体表面的消毒。紫外线穿透力弱，需直接照射，且对人体有伤害，使用时注意防护。

4.过滤除菌：适用于不耐热的液体（如血清、抗生素溶液）。使用滤膜孔径为0.22μm或更小的滤器。

5.化学消毒：使用化学消毒剂（如75%乙醇、0.1%新洁尔灭、含氯消毒剂等）对皮肤、工作台面、实验器械表面进行消毒。

2.3无菌操作基本流程

1.操作前准备：

*实验台面用75%乙醇擦拭消毒。

*所需的玻璃器皿、培养基、接种工具等均需经灭菌处理。

*操作人员双手用75%乙醇棉球擦拭消毒。

2.操作过程：

*在超净工作台或无菌操作箱内进行，操作前开启紫外灯照射一段时间，然后关闭紫外灯，开启风机。

*试管、三角