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高效液相使用培训课件

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目录

01

高效液相基础知识

02

高效液相操作流程

03

高效液相常见问题

04

高效液相实验技巧

05

高效液相安全规范

06

高效液相案例分析

高效液相基础知识

01

定义与原理

高效液相色谱法（HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量混合物中各组分的分析技术。

高效液相色谱法的定义

检测器用于检测色谱柱流出物中的组分，常见的有紫外-可见光谱检测器和质谱检测器。

检测器的工作机制

色谱柱是HPLC的核心部件，通过固定相和流动相的相互作用，实现混合物中各组分的分离。

色谱柱的作用原理

01

02

03

主要组成部分

输液泵是高效液相色谱仪的核心，负责精确输送流动相，保证分析的重复性和准确性。

输液泵系统

检测器用于检测色谱柱分离后的组分，常见的有紫外-可见光检测器和荧光检测器。

检测器

色谱柱是分离混合物的关键部件，根据固定相的不同，可以分离不同性质的化合物。

色谱柱

自动进样器可以提高样品分析的效率和重复性，减少人为操作误差，适用于大批量样品分析。

自动进样器

应用领域

高效液相色谱广泛应用于药物成分的分离与鉴定，确保药品质量和安全。

药物分析

01

HPLC用于检测水和土壤中的污染物，如重金属和有机化合物，保障环境健康。

环境监测

02

通过高效液相色谱技术，可以检测食品中的添加剂、农药残留等，确保食品安全。

食品检测

03

在生物化学领域，HPLC用于蛋白质、氨基酸等生物大分子的分析，推动科学研究进展。

生物化学研究

04

高效液相操作流程

02

设备准备与开机

确保所有耗材如色谱柱、过滤器等处于良好状态，试剂新鲜且符合实验要求。

检查耗材与试剂

开启高效液相色谱仪电源，等待系统自检完成，确保所有部件正常运行。

开启电源与系统自检

将色谱仪、检测器、泵等组件正确连接，并检查所有接口是否密封良好。

连接系统组件

样品准备与进样

根据分析需求，样品需经过稀释、过滤或衍生化等步骤，确保其适合高效液相色谱分析。

样品的制备

使用自动或手动进样器将样品准确地注入色谱系统，保证分析的重复性和准确性。

进样技术

确保样品瓶干净无污染，使用合适的瓶盖和垫片，防止样品交叉污染或蒸发损失。

样品瓶的处理

数据分析与处理

高效液相色谱仪通过检测器收集数据，生成色谱图，为后续分析提供原始信息。

数据采集

使用专业软件对色谱图中的峰进行识别和积分，确定各组分的保留时间和峰面积。

峰识别与积分

根据峰面积与浓度的标准曲线，计算样品中各组分的含量，确保结果的准确性。

定量分析

通过分析标准品和空白样品，评估实验数据的可靠性，确保分析结果的稳定性。

质量控制

高效液相常见问题

03

故障诊断与排除

检查泵压力是否稳定，流速是否准确，以排除堵塞或密封损坏导致的泵故障。

检测泵故障

通过比对标准样品的响应，诊断检测器是否因老化或污染导致灵敏度下降。

分析检测器异常

观察柱压和分离效果，判断柱子是否因使用时间过长或清洗不当而性能下降。

柱子性能下降

检查连接点和管路，确保无泄漏，以避免影响分析结果的准确性和重复性。

系统泄漏问题

常见操作错误

01

错误的流动相配比

使用高效液相时，流动相配比不当会导致分离效果差，影响分析结果的准确性。

02

柱温设置不当

柱温过高或过低都会影响色谱柱的分离效率，甚至损坏色谱柱，需根据样品特性合理设置。

03

样品注入量过多

样品注入量超过色谱柱的容量会导致峰形变宽，分辨率下降，影响检测灵敏度。

04

检测器波长选择错误

选择错误的检测器波长会降低检测灵敏度，甚至无法检测到目标化合物，需根据物质的紫外吸收特性选择合适波长。

维护保养要点

为保证分析结果的准确性，建议每使用一定次数后更换色谱柱，避免污染和性能下降。

定期更换色谱柱

确保泵的密封圈和密封垫完好无损，防止泄漏，保证系统稳定运行。

维护泵的密封性

定期清洗检测器的流通池，避免样品残留导致的基线漂移和检测器灵敏度下降。

防止检测器污染

流动相应储存在适当的条件下，避免光照和温度变化，以防化学性质改变。

正确储存流动相

定期校准仪器，确保数据的准确性和重复性，避免因仪器老化导致的误差累积。

校准仪器

高效液相实验技巧

04

提高分离效率

选择合适的溶剂比例和pH值，可以显著提高目标化合物的分离效率和峰形。

优化流动相组成

通过改变色谱柱的温度，可以影响样品的保留时间和分离度，从而提高分离效率。

调整柱温

采用梯度洗脱技术，根据样品的极性变化逐步改变流动相的组成，有效提升复杂样品的分离效果。

使用梯度洗脱

优化检测条件

根据样品的极性和分离要求，选择适宜的流动相组成，以提高分离效率和检测灵敏度。

选择合适的流动相

通过实验确定最佳柱温，以改善样品的保留时间和峰形，减少拖尾现象，提高分离效果。

优化柱温设置

根据样品的最大吸收波长调整紫外