CN113416748A 一种合成大麻二酚的表达载体、异源表达方法及应用 （湖北碳元本草生物科技有限公司）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN113416748A

(43)申请公布日2021.09.21

(21)申请号202110656198.9

(22)申请日2021.06.11

(71)申请人湖北碳元本草生物科技有限公司地址430000湖北省武汉市东湖新技术开

发区光谷软件园六期1号楼2层102号

D18

(72)发明人曹应龙虞沂邹小林

(74)专利代理机构上海精晟知识产权代理有限公司31253

代理人龙凯

(51)Int.CI.

C12N15/82(2006.01)

C12N15/54(2006.01)

C12N15/60(2006.01)

C12N15/53(2006.01)

C12N5/10(2006.01)

C12N1/21(2006.01)

A01H5/12(2018.01)

A01H6/82(2018.01)

C12P7/22(2006.01)

权利要求书1页说明书7页序列表13页附图6页

(54)发明名称

Apoplast

Apoplast

(57)摘要

CN113416748A本发明公开了一种合成大麻二酚的表达载体、异源表达方法及应用，通过体外从头设计，通过己酰-CoA合酶、聚酮肽合酶、橄榄酸合酶、异戊烯基转移酶和大麻二酚酸合酶五种酶，构建5个基因表达盒载体，在烟草中瞬时共转化实验表明，通过上述方式可以实现CBD的高产。本发明利用合成生物学技术手段可实现高效生产CBD,其合成产物中不含THC,测定的CBD含量高；此外，烟草作为农业生产的常规经济作物，其种植技术、

CN113416748A

CN113416748A权利要求书1/1页

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1.一种合成大麻二酚的表达载体，包含表达合成大麻二酚所需的酶，其特征在于，所述酶为AAE1、TKS、OAC、CsPT4和CBDAS。

2.包含权利要求1所述载体的烟草细胞。

3.权利要求2所述烟草细胞在生产大麻二酚中的应用。

4.一种构建合成大麻二酚工程菌的方法，其特征在于，采用组合基因表达盒的方式构建编码基因AAE1、TKS、OAC、CsPT4、CBDAS的重组载体，将重组载体转化至农杆菌中即得。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述重组载体通过pUC19-TKS分别添加编码目的基因OAC、CsPT4、CBDAS得到中间载体，然后连接pC2300S载体，通过同源重组添加基因AAE1获得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在构建所述中间载体时，所述编码基因OAC和CsPT4分别添加15-20个简并碱基N。

7.一种通过异源表达生产大麻二酚的方法，其特征在于，将包含权利要求4-6任一项所述工程菌侵染烟草叶片，获得表达产物。

8.根据权利要求7所述生产大麻二酚的方法，其特征在于，通过使用LB培养基培养所述工程菌，重悬后侵染烟草。

9.根据权利要求8所述生产大麻二酚的方法，其特征在于，所述烟草叶片中大麻二酚含量为0.69054mg/mL。

CN113416748A说明书1/7页

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一种合成大麻二酚的表达载体、异源表达方法及应用

技术领域

[0001]本发明涉及大麻二酚植物表达技术领域，具体涉及一种合成大麻二酚的表达载体、异源表达方法及应用。

背景技术

[0002]大麻二酚(CBD)是工业大麻的主要有效成分。工业大麻又称作汉麻或者火麻，在过去的6000年里，中国一直用汉麻制作一些纺织用品。CBD不同于有精神活性的四氢大麻酚(THC),它是一种多靶点的药物，有抗炎，镇痛，抗焦虑，抗癌等药理活性，无成瘾性，反而能抵消THC的致幻作用，被称为“反毒品的化合物”。CBD应用广泛，在化妆品中，有修复基底细胞，有抗氧化，抗衰老的功效；做食品添加剂，可以增加食品营养；同时CBD还可以作为癫痫的治疗药物之一。总之，CBD已经渗透到纺织品，药品，化妆品，食品等各个行业。由于CBD产业价值巨大，越来越多的国家和地区开始放开医用大麻合法化，可见，CBD具有巨大的商业价值和广阔的发展前景。

[0003]