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广州华南生物工程有限公司
蜡样芽孢杆菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法/二组分）说明书
DetectionKitforBacilluscereus(PCR-FluorescenceProbing/twocomponent)Protocol
一、检验原理
本试剂盒采用PCR方法结合荧光探针的扩增检测技术，反应在同一管内连续进行，操作简单。试剂含
有UDG/dUTP防污染系统，在室温条件下即可发挥作用。有效防止了污染，能对样品中的蜡样芽孢杆菌DNA
进行快速检测。
、
二用途
本试剂盒适用于食品、环境样品中蜡样芽孢杆菌的特异性检测。
三、试剂盒组成
组分规格24T/盒规格48T/盒
PCR反应预混液（蓝盖管）1管（325μl）1管（650μl）
蜡样芽孢杆菌反应液（紫盖管）1管（50μl）1管（100μl）
蜡样芽孢杆菌阳性对照（红盖管）1管（50μl）1管（100μl）
阴性对照（绿盖管）1管（1000μl）1管（1000μl）
使用说明书1份1份
注意：不同批号的组分不可以互换使用，试剂盒中组分（包括阳性对照）使用前需完全融化并充分混匀（建议
采用轻弹或颠倒的方式混匀，不建议使用涡旋振荡器混匀），应尽量避免反复冻融!
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列，BIO-RAD（含MJ）系列等荧光定量PCR检测仪等。
五、储存条件及有效期
本试剂盒于-20℃保存，有效期为12个月。
六、产品性能指标
本试剂盒的最低检测限为500copies/ml。
七、操作方法
1.样本前处理
参照行业标准SN/T3932-2014进行前处理与增菌培养。无菌操作取样品25g加入到含有225mlLB培养
基的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min~2min；或放入盛有225mlLB培养基的均质杯中，以8,000
r/min~10,000r/min均质1min~2min。若样品为液态，吸取25ml样品至盛有225mlLB培养基的无菌锥形瓶
(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。将上述样品匀液于30℃±1℃培养9h~18h，取1ml备
用。
2.样品DNA提取（样本处理区）
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取DNA。阴性对照参与提取，以对环境进行监控。阳性
对照无需提取，直接使用。
3.反应组分配制
根据不同的PCR仪选择反应管，反应总体积为20μl，反应液在配液区配制，加样在样本处理区，每个
测试反应体系配制如下表：
反应管对照管
检测管
组分阳性对照阴性对照
PCR反应预混液13μl13μl13μl
蜡样芽孢杆菌反应液2μl2μl2μl
蜡样芽孢杆菌阳性对照―5μl―
阴性对照――5μl
样品DNA5μl――
总体积20μl
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