CN114591923A 大麻二酚酸合成酶突变体及其构建方法与应用 （森瑞斯生物科技(深圳)有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(21)申请号202210502557.X

(22)申请日2022.05.10

(71)申请人森瑞斯生物科技(深圳有限公司地址518067广东省深圳市南山区招商街

道沿山社区南海大道1019号南山医疗器械产业园A、B座B402

(72)发明人许薷方敖悦陈嘉威胡瑾瑜罗小舟

(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211

专利代理师林娟

(51)Int.CI.

C12N9/00(2006.01)

C12N15/52(2006.01)

C12N15/81(2006.01)

C12N1/19(2006.01)

C12P7/42(2006.01)

C12R1/865(2006.01)

(10)申请公布号CN114591923A(43)申请公布

(10)申请公布号CN114591923A(43)申请公布日2022.06.07

(54)发明名称

大麻二酚酸合成酶突变体及其构建方法与应用

(57)摘要

CN114591923A本发明公开了大麻二酚酸合成酶突变体及其构建方法与应用，属于合成生物领域基因工程改造技术领域。与野生型的CBDAS相比，应用本发明所提供的CBDAS点突变体生产CBDA时，CBDA的产量均有不同幅度的提高，其中，C446A突变体所对应的CBDA

CN114591923A

CN114591923A权利要求书1/1页

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1.大麻二酚酸合成酶突变体，其特征在于，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第56位天冬酰胺替换为组氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第213位组氨酸替换为天冬氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第256位甲硫氨酸替换为异亮氨酸，或，将第256位甲硫氨酸替换为异亮氨酸并将第116位丝氨酸替换为丙氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第343位谷氨酰胺替换为谷氨酸，或，将第343位谷氨酰胺替换为谷氨酸并将第116位丝氨酸替换为丙氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第365位天冬酰胺替换为赖氨酸，或，将第365位天冬酰胺替换为赖氨酸并将第362位天冬氨酸替换为丙氨酸，或，将第365位天冬酰胺替换为赖氨酸并将第116位丝氨酸替换为丙氨酸，或，将第362位天冬氨酸替换为丙氨酸、第365位天冬酰胺替换为赖氨酸，以及第116位丝氨酸替换为丙氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第398位谷氨酰胺替换为赖氨酸，或，将第398位谷氨酰胺替换为赖氨酸并将第116位丝氨酸替换为丙氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第446位半胱氨酸替换为丙氨酸；或者，

所述突变体的氨基酸序列是以SEDIDNO:1所示序列的第29位至544位为基础，将第474位赖氨酸替换为谷氨酰胺。

2.带有信号肽的大麻二酚酸合成酶突变体，其特征在于，由SEDIDNO:1的第1~28位所示信号肽与SEDIDNO:1的第29位至544位氨基酸组成，或，由SEQIDNO:2所示信号肽与SEDIDNO:1的第29位至544位氨基酸组成。

3.编码权利要求1或2所述大麻二酚酸合成酶突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的核酸构建体。

5.表达权利要求1或2所述大麻二酚酸合成酶突变体的重组细胞。

6.根据权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，是以酿酒酵母为宿主构建得到的。

7.应用权利要求5所述重组细胞合成大麻二酚酸的方法，其特征在于，以橄榄醇酸为底物，经大麻二酚酸合成酶突变体转化得到大麻二酚酸。

8.权利要求1或2所述大麻二酚酸合成酶突变体在合成大麻二酚酸中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，于体外催化体系中，催化橄榄醇酸得到大麻二酚酸。

CN114591923A说明