萼脊兰EF1α基因的克隆及序列分析论文答辩.pptVIP

萼脊兰EF1α基因的克隆及序列分析答辩人:学号:指导老师：日期：2015.05.12

主要内容研究背景及意义材料与方法结果与分析讨论致谢

研究背景及意义萼脊兰(Sedireajaponica)是兰科(Orchidaceae)萼脊兰属(Sedirea)植物，附生草本，茎短，具数枚叶，叶二列，稍肉质或厚革质，总状花序，疏生数朵花。萼脊兰的花小而素雅，其花色典雅且具有迷人的芳香，观赏期较长，养护简单，且耐寒，故深受人们的喜爱。因此，萼脊兰越来越受到大家的关注，成为了大家研究的热点。

研究背景及意义

材料与方法按照NCBI中登录的植物翻译延长因子同源核苷酸保守序列设计简并引物，EF1aF:ACATCAACATCGTGGTCATTGG，EF1aR:GCCCTTGTACCAGTCAAGGTTG。以萼脊兰叶片作为实验材料，采用Trizol法提取萼脊兰总RNA,并利用RT-PCR技术克隆翻译延伸因子—EF1α。运用DNAMAN、Primer5.0对EF1α基因进行剪切和简单分析，利用在线网站NCBI、ExPaSy-Protparam、nps@、SWISS-MODEL等对EF1α编码的蛋白进行同源序列的比对和结构域以及模体的分析、理化性质的分析、二级结构的分析、三级结构的构建，利用CLUSTALX1．81和MEGA4．0软件进行进化树分析，采用邻接算法进行。

结果与分析1.萼脊兰总RNA提取结果RNA条带清晰，且28S条带的亮度大约是18S的两倍，表明RNA无明显降解，可用于逆转录cDNA

结果与分析2.PCR产物鉴定结果显示条带清晰无拖尾现象，在500bp-750bp之间，推测所克隆的基因为所需基因

结果与分析4.菌液阳性克隆鉴定有条带且亮度清晰无拖尾现象，大小约620bp,可以送去测序

结果与分析5.测序结果

结果与分析7.蛋白三级结构利用SWISS-MODEL对EF1α编码的蛋白进行三级结构的预测，与ELONGATIONFACTOR1-ALPHA2的相似性最高达81.07%，以ELONGATIONFACTOR1-ALPHA2（4c0s.1.A）为模型构建。

结果与分析9.进化树

由于延伸因子表达比较稳定，近几年来在许多文献中都有以EF1α作为植物重要的内参基因来研究，而在萼脊兰相关基因的研究中，还没有对萼脊兰内参基因的研究，本文研究克隆了萼脊兰的EF1α片段填补了这一空缺，为对萼脊兰内参基因的筛选奠定了基础。本文并没有对延伸因子EF1α是否能够成为萼脊兰生长发育和生理过程的内参标准进行研究，这是我们应该进行更深一步研究的内容。讨论