植物组织培养—第一章.pptVIP

第一章实验室与基本操作

;第一节实验室及其基本设备;;自动双重纯水蒸馏器;灭菌室：

高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌器。

作用：培养基、器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒

;细菌过滤器;

二、无菌操作室

;培养细胞或组织的各种器皿;四、细胞学实验室：

作用：细胞学和组织学观察。

需备有高倍显微镜、体视显微镜、倒置显微镜、各种相机、恒温箱、切片机、恒温水浴、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片等。;五、温室：

;第二节基本操作;二、灭菌方法：;过滤灭菌：

使溶液通过夹有微孔滤膜的漏斗，滤膜孔径需选用0.3～0.45μm。在无菌环境下，用真空泵抽滤，其滤液为无菌。液体培养（不耐高温活性物质）

药剂灭菌：

用70～75%酒精、0.1～0.2%升汞、10%的次氯酸钠、新洁尔灭、Clorox等药剂灭菌的方法。培养材料灭菌。

烧灼灭菌：

用酒精灯烧灼达到灭菌的目的。接种器具灭菌。

射线灭菌：

用紫外线照射的方法灭菌。照射时间一般为15～30min。接种时应关闭紫外灯。室内灭菌。;第三节培养基的配置;1、无机盐(inorganicelements)——大量元素和微量元素

大量元素

N：用量最多。常用的有硝态氮和铵态氮，KNO3、NH4NO3植物组织

从培养基中吸收氮后形成蛋白质。

P：在植物组织培养在的细胞增殖分化大量需要。主要从NaH2PO4、

KH2PO4供应。磷参与核酸、能量代谢。

K：直接影响培养物中酶的活性。主要由KCl、KNO3或KH2PO4供应。

Ca、S、Mg：CaCl2、Ca(NO3)2作为Ca来源，MgSO4作为S和Mg的来源。;2、有机化合物（organiccompounds);维生素类;3、植物生长调节物质;赤霉素（GA3）、脱落酸（ABA）和多效唑（PP333）等生长调节物质也在组织培养中应用。

GA3—主要用于促进试管苗的生长。

ABA—体胚的发育成熟。

PP333—促进壮苗。

在组织培养中，生长素的主要作用是诱导外植体脱分化产生愈伤组织及促进培养物生长，诱导根器官的分化。

细胞分裂素的主要作用是促进细胞的分裂和分化，诱导不定芽和胚状体的分化和形成，延缓组织衰老，增加蛋白质合成。

;4、附加物类

;二、培养???的种类;（二）培养基按试验目的分为：

诱导培养基，继代培养基，分化培养基，生根培养基。;分化培养：

由愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体）的培养基。

①不加任何激素的基本培养基，即可诱导分化。如水稻、珍珠粟、甘蔗等植物。

②加较高浓度细胞分裂素和少量生长素培养基。如烟草、矮牵牛、四季海棠、天竺葵、菊花、倒挂金钟等组织的分化。

③只加细胞分裂素的培养基。如豌豆、油菜、小麦等。

;生根培养基：

诱导再生小苗生根的培养基。

在无任何生长激素的基本培养基中就可生出良好的根系。如烟草、红薯、草莓、枸杞等。

有些需加入少量的NAA、IAA或IBA以诱导根。

有些需要减低培养基中无机盐的浓度。如用MS培养基中1/2或1/4的无机盐诱导生根，常可获得良好的效果。;;NAA0.5mg/L;（三）培养基按其物理性质划分为：

固体培养

在培养基中加入一定量的凝固剂，使液体培养基固化,一般用于组织或器官培养.

优点：使用方便，占地不大。

缺点：培养外植体只能有部分组织与培养基接触，培养物上下部因接受养分不均匀，引起组织生长的差异。

液体培养

培养物消毒后直接置于液体培养基中培养,一般用于细胞培养。

优点：培养物吸收营养比较充分，容易获得均匀一致的细

胞群体。

缺点：转换培养基较麻烦。

;液体培养又分为静止培养和振荡培养两种形式。

;振荡培养

将装有培养物和液体培养基的器皿置于转床或摇床上进行培养，它既能使培养物在培养过程中均匀的接触吸收培养基成分，又能保持良好的通气条件.

摇床有旋转式、半旋转式和往复式三种。速度比转床快。

;（三）培养基的筛选;三、培养基的制备;配制母液注意几点：;几种培养基成分表(mg/L);

（二）培养基配制

;第四节离体培养体系的建立;二、外植体选择的基本原则

1.再生能力强：

基因型；分化程度；发育年龄；器官和组织的类型、部位等。

2.遗传稳定性好；

3.外植体来源丰富；

4.外植体容易灭菌：地上比地下、一年生比多年生、幼嫩比老龄、健康比受伤组织灭菌容易。

5.外植体大小适宜：;5.外植体大小对分化的影响;三、培养材