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实验动物免疫操作标准流程

引言

实验动物免疫操作是生命科学研究中获取特异性抗体、建立疾病模型、评估疫苗或药物免疫原性及保护效力等实验的基础技术手段。规范化的免疫操作不仅是保证实验结果准确性、可靠性和可重复性的前提，更是保障实验动物福利、确保操作人员安全的核心要求。本流程旨在为实验动物免疫操作提供一套通用的、科学的标准指引，适用于常规实验动物的免疫接种。

一、实验前准备

1.1实验方案的制定与审批

免疫实验开始前，必须制定详细的实验方案。方案应明确实验目的、选用的实验动物种类、品系、年龄、性别、体重范围及健康状况要求；确定免疫原（抗原/疫苗）的种类、来源、批号、保存条件及稀释方法；明确免疫途径、免疫剂量、免疫次数及各次免疫之间的间隔时间；制定免疫后动物观察指标、样本采集计划（如血清、脾脏等）及处理方式。该方案需通过单位实验动物伦理委员会的审批，并严格按照审批后的方案执行。

1.2实验材料的准备与核查

1.2.1免疫原与佐剂

免疫原：根据实验方案取出所需免疫原，核对其名称、批号、浓度等信息，确保无误。若需稀释，应使用无菌的生理盐水、PBS缓冲液或其他指定稀释液，按预定比例进行精确稀释，并充分混匀。稀释过程中应注意无菌操作，避免污染。

佐剂：如使用佐剂（如弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂等），需提前了解其特性及乳化要求。佐剂与抗原的乳化应按照推荐比例进行，乳化过程应充分，直至形成稳定的乳剂。可通过将一滴乳化液滴入冷水中，观察其是否不散开并保持完整形态来判断乳化效果。乳化操作应在无菌条件下进行，避免引入杂质。

1.2.2实验动物

按照实验方案要求，从合格的实验动物繁育或供应单位获取动物。抵达后，应进行适应性饲养，时间通常不少于一周。

免疫前对动物进行健康状况检查，包括精神状态、活动情况、被毛光泽度、眼鼻有无分泌物、饮食及排便情况等，确保动物健康无异常。

根据实验需要对动物进行标记，标记方法应清晰、持久且对动物无过度应激，如耳标、染色、剪趾等，并准确记录。

免疫前如需禁食禁水，应按实验方案执行特定时间。

1.2.3器材与试剂准备

注射器材：根据免疫途径和动物大小选择合适规格的无菌注射器（如1mL、2mL、5mL等）和针头（如皮下、肌肉注射可选较细针头，静脉注射需根据血管粗细选择）。注射器和针头应包装完好，在有效期内使用。

消毒用品：准备75%医用酒精、碘伏、无菌棉球或棉片、生理盐水（用于皮肤清洁）。

保定器材：根据动物种类和大小准备合适的保定工具，如鼠固定器、兔固定箱、保定架等，或由熟练人员进行徒手保定。

其他：废物处理袋（区分感染性废物与普通废物）、记录本、记号笔、恒温箱（如需保持免疫原温度）等。

1.3实验环境准备

免疫操作应在洁净、安静、光线适宜的环境中进行，最好在超净工作台或生物安全柜内操作，以减少污染风险。操作台面应清洁消毒。实验动物饲养室环境应符合相应等级标准，温度、湿度、光照、通风控制在适宜范围。

二、免疫操作具体步骤

2.1操作人员准备

操作人员应穿戴好个人防护用品，包括实验服、一次性手套、口罩，必要时佩戴护目镜或面罩。操作前用肥皂或洗手液洗手，并用75%酒精擦拭双手或进行手消毒。

2.2动物保定

根据动物种类选择恰当的保定方法，确保动物安全、舒适，同时便于操作，避免动物挣扎造成损伤或注射失败。保定过程中动作应轻柔，避免过度刺激动物。

啮齿类动物（如小鼠、大鼠）：通常采用徒手保定，一手固定头部及躯干，另一手进行注射操作；或使用专用固定器。

家兔：可使用兔固定箱，或由助手协助固定头部和四肢。

其他动物：根据其习性和体型选择合适的保定方式，必要时使用镇静或麻醉（需在方案中注明并获得伦理许可）。

2.3免疫途径与操作方法

根据实验方案选择合适的免疫途径，并严格按照以下规范操作：

2.3.1皮下注射(SubcutaneousInjection,SC)

部位选择：通常选择皮肤松弛、易于操作的部位，如小鼠颈部背侧、大鼠背部两侧、家兔背部或耳后。

操作步骤：

1.用75%酒精棉球或棉片消毒注射部位皮肤，待酒精挥发干。

2.左手拇指和食指轻轻提起注射部位皮肤，形成一皮褶。

3.右手持注射器，针头斜面向上，与皮肤呈30-45度角刺入皮下。进针深度适中，避免刺入肌肉或腹腔。

4.轻轻回抽注射器活塞，观察有无回血。若无回血，缓慢推注免疫原。

5.注射完毕，用干棉球轻压针刺部位，迅速拔出针头，避免药物外渗。

2.3.2肌肉注射(IntramuscularInjection,IM)

部位选择：选择肌肉丰满、远离大血管和神经的部位，如小鼠/大鼠后肢股四头肌（大腿外侧肌肉）、家兔后腿肌肉或臀部肌肉（注意避免伤及坐骨神经）。

操作步骤：

1.消毒注射部位皮肤。

2.左手固定注射部位肌肉，右手持注射器，针头与皮