3-4-2-实训-体外抗菌试验.pptVIP

实训体外抗菌测定技术;（一）实训目的

1、掌握体外抗菌技术的方法

2、掌握琼脂扩散法和联合抗菌试验技术;（二）实训原理;（三）材料和用具

普通琼脂培养基、培养皿、滴管、镊子、无菌滤纸片、金黄色葡萄球菌培养液、大肠杆菌培养液、0.1%新洁尔灭、0.9%生理盐水等。;（四）操作步骤

1、滤纸片法测定几种抗生素的抑菌效果

以一定直径（6-8mm）的无菌滤纸片，蘸取一定浓度的被检药液，将其紧贴在含菌平板上，如果纸片上含有药液，便会沿琼脂向四周扩散，且对该试验菌有抑制作用，经一定时间培养后，就可在滤纸片周围形成不长菌的透明圈。

试验菌株的培养→制备混菌平板→加药液→培养→观察;滤纸片法操作图示;1滤纸片2含菌平面3抑菌圈;2、挖沟法测定药物的抗菌效果

◆试验菌株的培养---金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌；

◆制备无菌平板---熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基每皿约20ml；

◆挖沟---在平板中央；

◆接种试验菌---在沟槽两侧垂直划线接种各试验菌株；

◆加药、培养---将半流动药物或中药液用无菌吸管或直接加入沟内，30-35℃培养箱中培养24-48h后观察结果。;﹡结果---除对照管外，其余1-5管的青霉素浓度成2n倍数降低。对照管因未加青霉素，应有菌生长，液体呈混浊状。

在1-5管中，前几管可能清彻透明，随着青霉素浓度降低，后几管逐渐出现混浊（已有菌生长）。

呈现澄清（即无菌生长）的青霉素最高稀释倍数试管的浓度即为青霉素对该试验菌株的最小抑菌浓度（MIC）。;4、纸条试验测定两种抗生素的联合抗菌效果

在含菌平板上垂直放置两条浸有不同药液的滤纸条，培养后观察两药形成的抑菌区的图形来判断两药联合应用时是无关、拮抗或协同作用。;（五）实训结果

（六）思考题

﹡化学药物对微生物所形成的抑菌圈未长菌部分是否说明微生物已经被杀死？如何通过实验加以确定，请自行设计实验。

﹡影响MIC测定的主要因素有哪些？抗生素有哪几种联合抗菌效果？