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实验八
维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
实验原理
维生素B1又称盐酸硫胺（thiaminehydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
性质
溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶
硫色素反应：
紫外吸收特性：Amax=246nm
与生物碱沉淀试剂反应
氯化物特性：
特征性鉴别
含量测定
氯化物检查
原理
特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物分析》第六版，P258）
含量测定
维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，
实验方法
鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。
含量测定
精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置100ml量瓶中→加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀→干燥滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中，共2份，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀→测A246，用吸光系数计算浓度。
如何计算出所需要的量？
稀释倍数？
实验内容与要求
鉴别试验
吸收波长选择
精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD%
重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD%
稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD%
加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验
含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
如何引用？
线性关系和范围
分析方法的验证
1
精密度试验
2
重现性试验
3
加样回收试验
4
稳定性试验
5
精密度试验
目的
检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度
要求
用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内
RSD2.0%……仪器分析
精密度试验（示例）
实验
序号
信号值
平均值
RSD
1
0.512
0.510
0.2%
(2.0%)
2
0.508
3
0.511
4
0.509
5
0.510
6
0.509
重现性试验
目的
考察样品溶液制备方法的可靠程度
要求
同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
RSD2.0%……仪器分析
重现性试验(示例)
试验
序号
称样量
（g）
测定值
（mg）
含量
（mg/g）
平均含量（mg/g）
RSD
（%）
1
0.1666
22.04
132.29
134.53
0.3%
2.0%
2
0.1667
24.82
148.89
3
0.1669
21.90
131.22
4
0.1742
23.54
135.13
5
0.1667
20.86
125.13
6
…
…
…
稳定性试验
目的：
考察样品溶液制备后多少时间内稳定
要求
要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积。
RSD2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定；
RSD2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD2.0%，否则要尽快测定
同批、同法
序号
时间
(min)
信号值
平均
信号值
RSD
（%）
RSD
（%）
1
0
0.505
0.507
(2.0%)
(2.0%)
2
15
0.507
3
30
0.509
4
45
0.513
5
60
0.525
6
90
0.548
7
120
0.567
稳定性试验(示例)
加样回收率试验
目的
考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度
要求
设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
RSD2.0%
加样回收试验
序号
称样量
（g）
待测组分含量
（mg）
对照品加入量
（mg）
测得量（mg）
回收率（%）
平均加样回收率（%）
RSD
（%）
1
0.16
65.28
2
0.2500
15.0
27.2
100.1
3
0.2512
4
0.2509
53.04
5
0.2500
15.0
29.8
98.6
6
0.2500
7
0.2504
42.84
8
0.2500
15.0
33.1
100.0
9
0.2510
取含量测定时
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