第三章-常用生物化学检验技术.pptVIP

第三章常用生物化学检验技术;第一节光谱分析技术;;按波长区域分;;吸收光谱（absorptionspectrum）即物质对不同波长光的吸收程度不同而产生的光谱。

发射光谱是由物质分子或原子吸收了外来的能量后发生分子或原子间的能级跃迁而产生的光谱。;分类;;朗伯-比尔定律：

I0：入射光强度C:溶液浓度

b:液层厚度I:透射光强度

T:透光度A:吸光度

k:吸光系数;三、分光光度计的基本结构;（一）光源;（二）单色器;（三）比色杯;721可见分光光度计

;722系列可见分光光度计;SP-756P紫外可见分光光度计;TENSOR系列红外光谱仪;四、分光光度技术的定量测定方法;

（一）对比法（标准对照法）

实际测定过程中，用一已知浓度的测定物按测定管同样处理显色，读出吸光度，再根据前式计算。

A标准=ε标准C标准L标准

A样品=ε样品C样品L样品

A：吸光度；ε：摩尔吸光度；C：溶液浓度；L：液层厚度;因标准液和样品液中溶质为同一物质，

ε样品=ε标准

因盛标准液和测定液的比色杯径长相同

L样品=L标准

故上二式可写成：

A标准/A样品=ε标准C标准/ε样品C样品

C样品=A样品/A标准×C标准;（2）标准曲线法

配制一系列已知不同浓度的测定物溶液，按测定管同样方法处理显色，分别读取各管吸光度。

以溶液浓度为横座标，吸光度为纵座标，在方格座标纸上作图得标准曲线，根据测得吸光度值从标准曲线上读得测定物的浓度。;标准曲线使用注意事项;应用中注意的问题

①Lambert-beer’slaw的偏离：该定律只适应于一定浓度范围，稀溶液能很好的服从该定律，A宜在0.05～1.0之间，超过该范围→偏离→计算结果与实际浓度不相符

②选择波长：最大吸收波长，因为a.灵敏；b.避免杂质干扰

③参比溶液（空白管）：消除背景效应，应包含除待测溶质以外所有的成分。;空白管：

测量过程中，因比色皿本身和溶剂也会产生一定的光吸收，故设置一个空白管，即其中除了待测溶质以外，其它的成??完全相同。

测量时，首先以空白管对准光路对仪器调零，既消除比色皿本身对光的吸收，又消除了非待测物对光的吸收，所测值即为待测物造成的光吸收。;火焰光度法的定义

火焰光度法是以火焰为激发光源，用光电检测系统测量被测元素所发射的辐射强度来进行定量分析的方法。

它是一种简化的发射光谱分析法。;火焰光度分析法;特点;;仪器装置（1）;（一）、基本原理;（二）、影响因素;《硅酸盐工业分析》课件;《硅酸盐工业分析》课件;原子吸收光谱分析(AAS)：利用原子吸收光谱进行定量分析的技术。;基本原理;原子吸收分光光度计结构;1.选择性高，干扰少。共存元素对待测元素干扰少，一般不需分离共存元素。;;分子荧光分析的特点：;影响因素