第五章-动物细胞融合与单克隆抗体技术.pptVIP

第五章动物细胞融合与杂交;5.1细胞融合与杂交;一、概念;二、原理;细胞融合过程可分为：

凝集：细胞凝集与细胞膜的糖蛋白有关

蛋白质分子重新分布：是细胞融合的必要前提

脂质分子重排：是实现细胞融合的关键

胞质合并：后续的稳定步骤。;1.病毒介导融合：;2.化学融合剂诱导融合（P107）;3.电融合技术 ;5.微流控芯片的细胞融合技术

（1）原理：

将微通道网络整合到生物芯片上，使得微流控系统成为细胞融合的理想平台

（2）特点：

实现大量单个成对细胞的融合;6.细胞融合的影响因素;四、融合子检出的选择系统;遗传互补选择-HAT培养基筛选;五、融合子的鉴定方法;六、细胞融合技术的应用;5.2杂交瘤技术;EmilvonBehring,1901,antitoxins;免疫球蛋白的单体分子结构;;;;;;;;1.亲本细胞的制备;动物免疫：;2.饲养细胞的制备及作用;3.细胞融合技术：;4.HAT选择性培养基的筛选;杂交瘤细胞的筛选：;5.阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）;酶联免疫吸附法(ELISA);6.杂交瘤细胞的克隆培养;7.杂交瘤细胞的冻存与复苏;8.单克隆抗体的规模化生产;转瓶培养;微载体培养;9.融合后杂交瘤不生长的原因分析：;10.杂交瘤细胞不分泌抗体或停止分泌抗体原因分析;三、T淋巴细胞杂交瘤;四、抗体的发展现状;2.鼠源单克隆抗体;(1)抗体DNA重组

通过基因工程技术用人蛋白取代鼠抗体的恒定区，仍保留鼠蛋白在抗体中的可变区，形成约含有65%人蛋白的嵌合抗体。

问题：含有一定量的鼠蛋白，亲和力差，产量低，纯化费用高，临床效果差;人－鼠嵌合抗体;;(2)噬菌体表达技术

用体外基因克隆技术将B细胞全套可变区基因克隆出来，插入噬菌体表达载体，转化工程细菌进行表达。

问题：

①没有经过天然抗体成熟，亲和力低

②需要相当复杂的抗体基因技术和多轮筛选才能获得。

;(3)外因鼠技术

将小鼠体内产生抗体的基因灭活，然后将人的抗体基因转入小鼠早期胚胎，获得含有人抗体的小鼠—外因鼠。

前景：①100%全人源化单克隆抗体

②2011年全球有7种治疗性全人单克隆抗体获得美国FDA和欧盟的批准，这些全人抗体几乎完全由转基因小鼠产生。

;五、单克隆抗体的应用;疾病的诊断或特异性抗原（蛋白）的检测

被动免疫治疗

大分子蛋白的提纯

生物导向药物;生物导向药物;H7N9新型流感病毒;谢谢各位！;小结：;作业：