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培养基平皿添加青霉素酶验证预试验

1培养基平皿名称及代号：

平皿名称

规格型号

批号

代号

NA平板

90mm

G90NA120712-4

NA-1

NA+P平板

90mm

G90NA+P120712-5

NA-2

TSA平板

90mm

G90TSA120626-1

TSA-1

TSA+P平板

90mm

G90TSA+P120712-3

TSA-2

NA接触碟

65mm

G65NA120712-4

NA-3

NA+P接触碟

65mm

G65NA+P120712-5

NA-4

TSA接触碟

65mm

G65TSA120705-1

TSA-3

TSA+P接触碟

65mm

G65TSA+P120712-3

TSA-4

2.培养基平皿层流采样

因目前本公司产品其抑菌性最强的是盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药及其制剂，所以本次验证将选择风量大粉尘大的地点进行采样，且采样时须进行盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药或其制剂生产操作。

2.1沉降菌检测采样

按《洁净区微生物监测标准操作规程》SOP-QA-031-V00进行操作。打开培养皿（规格型号：90mm）盖，使培养基表面在百级层流下暴露4小时（风淋4小时），再将培养皿盖盖上后交QC处理。

采样地点：107车间（由QA定具体位置）

采样高度：0.8~1.5m。（日常采样高度或平台上）

每种培养基采样数量：20皿/采样地点（百级层流）

2.2附着菌检测采样

按《洁净区微生物监测标准操作规程》SOP-QA-031-V00进行操作。采样完后再将培养皿交QC处理。

采样地点：201车间（由QA定具体位置）

每种培养基采样数量：20皿/采样地点（百级层流）

3促生长试验：

3.1菌种

（1）细菌：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]

铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]

大肠埃希菌[CMCC（B）44102]

（2）细菌芽孢：枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]

3.2菌液制备：

取接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上，经32.5脂培养基30～35℃培养18～24小时的新鲜营养琼脂培养基培养物，取上述培养物分别加入0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度（500～1000）cfu/ml。

3.4.2.3试验组：

采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至经采样后的培养基上，然后用无菌涂布棒快速地将其均匀涂布，每种菌悬液各接种2皿，于30~35℃培养72小时，测定菌数

3.4.3阳性对照组：(未经采样的各种测定所加的试验菌数。采用浇碟法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌菌悬液分别接种0.1ml加入培养皿，注入不超过45℃培养基平板)

采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至未经采样的各种测定所加的试验菌数。采用浇碟法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌菌悬液分别接种0.1ml加入培养皿，注入不超过45℃培养基15~20m中l，每种试验菌在每种培养基中平行制备2个平板，于23～28℃规定温度下培养72小时，测定菌数

3.5菌液组：（菌液组所用的培养基须使用新鲜制备培养基）

采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至NA测定所加的试验菌数。采用浇碟法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌菌悬液分别接种0.1ml加入培养皿，注入不超过45℃培养基和TSA培养基15~20m中l，每种试验菌在每种培养基中平行制备2个平板，于23～28℃30~35℃温度下培养72小时，

3.4.46供试品对照组：取经采样后的每种培养基平皿（未加菌处理的），于30~35℃培养120小时，按菌落计数法测定供试品本底菌数。

3.4..5判定可接受标准：

4.1阳性对照组的菌回收率均应在70%~130%之间，则促生长试验结果有效，否则判批培养基平皿适用性检查不符合规定。

注：阳性对照组回收率（%）=阳性对照组平均菌落数÷菌液组平均菌落数×100

4.2试验组的菌回收率均应在70%~130%之间，则促生长试验结果有效，否则需重新进行