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乳腺癌MCF7细胞中haS-miR-103对CARM1基因靶向调控机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

1.1.1乳腺癌现状

乳腺癌作为全球女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着女性的生命健康。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，乳腺癌新发病例高达226万例，超越肺癌成为全球发病率第一的癌症。在中国，乳腺癌同样是女性发病率最高的癌症，2020年新发病例约为42万例，城市发病率约为40/10万，农村发病率约为30/10万。并且，中国乳腺癌发病呈现年轻化趋势，高发年龄在45-55岁之间，比西方女性早10-15年。许多经济不发达地区的患者确诊时已处于晚期，给治疗带来极大挑战，严重影响患者的生活质量和生存预期。

1.1.2miRNA与癌症关系

miRNA（微小核糖核酸）是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，在转录后水平对基因表达进行精准调控。越来越多的研究表明，miRNA的异常表达与癌症的发生、发展、侵袭和转移等密切相关。在癌症进程中，miRNA可以像癌基因或抑癌基因一样发挥作用。例如，某些miRNA表达上调时，能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡，从而加速肿瘤的发展；而另一些miRNA表达下调，则无法有效抑制肿瘤相关基因的表达，同样会导致肿瘤细胞的失控生长。由于miRNA在癌症中的关键作用，其作为癌症诊断的生物标志物和潜在治疗靶点展现出了巨大的研究价值。通过检测特定miRNA的表达水平，有望实现癌症的早期精准诊断；同时，针对异常表达的miRNA设计靶向治疗策略，为癌症的治疗开辟新的途径。

1.1.3haS-miR-103与CARM1基因研究现状

在乳腺癌的研究领域中，haS-miR-103和CARM1基因已逐渐成为关注的焦点。已有研究发现，haS-miR-103在乳腺癌组织和细胞系中存在异常表达，且其表达水平与乳腺癌的临床病理特征，如肿瘤大小、淋巴结转移等密切相关。一些研究初步表明haS-miR-103可能参与乳腺癌细胞的增殖、凋亡、侵袭等生物学过程，但其具体的作用机制以及下游的靶基因尚未完全明确。

CARM1基因编码的共激活因子相关精氨酸甲基转移酶1（CARM1），是蛋白质精氨酸甲基转移酶（PRMTs）家族的成员之一，也被称为PRMT4。CARM1能够催化蛋白质中精氨酸残基的单甲基化和不对称二甲基化，在多种细胞生理活动，如转录调控、DNA损伤应答、细胞周期调控以及细胞分化中发挥关键调控作用。异常的CARM1表达与癌症等多种人类疾病相关，在乳腺癌中，CARM1的高表达被发现与肿瘤的恶性程度、不良预后相关。然而，目前对于haS-miR-103与CARM1基因之间是否存在靶向调控关系，以及这种关系在乳腺癌发生发展中的具体作用机制，仍存在大量的研究空白。深入探究两者之间的联系，将有助于进一步揭示乳腺癌的发病机制，为乳腺癌的精准治疗提供新的理论依据和潜在靶点。

1.2研究目的与内容

1.2.1研究目的

本研究旨在深入探究在MCF7细胞中haS-miR-103对CARM1基因的靶向调控关系，以及这种靶向作用如何影响MCF7细胞的生物学行为，包括细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等。通过明确haS-miR-103与CARM1基因在乳腺癌细胞中的分子调控机制，为乳腺癌的诊断、治疗和预后评估提供新的理论依据和潜在的生物标志物及治疗靶点。

1.2.2研究内容

细胞实验：培养MCF7细胞，构建过表达和低表达haS-miR-103的MCF7细胞模型，同时构建干扰和过表达CARM1基因的MCF7细胞模型。利用细胞转染技术将相关的表达载体或干扰序列导入MCF7细胞中，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术验证转染效果，确保成功构建稳定的细胞模型，为后续实验奠定基础。

haS-miR-103对CARM1基因的靶向验证：运用生物信息学软件预测haS-miR-103与CARM1基因的潜在结合位点。通过双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的直接靶向关系，将含有潜在结合位点的CARM1基因3-UTR序列克隆到荧光素酶报告载体中，与haS-miR-103模拟物或抑制剂共转染至MCF7细胞，检测荧光素酶活性的变化。同时，采用RNA免疫沉淀（RIP）实验进一步验证在细胞内源性环境下haS-miR-103与CARM1mRNA的相互作用，明确两者的靶向关系。

haS-miR-103靶向CARM1基因对MCF7细