CN115820728B 一种基因编辑的方法和用途 （上海贝斯昂科生物科技有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN115820728B(45)授权公告日2025.07.04

(21)申请号202210814386.4

(22)申请日2022.07.11

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN115820728A

(43)申请公布日2023.03.21

(73)专利权人上海贝斯昂科生物科技有限公司地址200120上海市浦东新区中国(上海)

自由贸易试验区金苏路200号、冀桥路700号23幢1楼

(72)发明人徐天宏周波赖祺

(74)专利代理机构上海光华专利事务所(普通合伙)31219

专利代理师王秋霞许亦琳

(51)Int.CI.

C12N15/85(2006.01)

C12N15/113(2010.01)

C12N15/62(2006.01)

CO7K19/00(2006.01)

C12N5/10(2006.01)

A61K38/50(2006.01)

A61K48/00(2006.01)

A61P27/02(2006.01)

(56)对比文件

CN112662674A,2021.04.16

CN109706185A,2019.05.03

CN107164377A,2017.09.15

CN111172133A,2020.05.19

CN114835821A,2022.08.02

WO2024012300A1,2024.01.18审查员吴静

权利要求书2页说明书11页序列表(电子公布)附图5页

(54)发明名称

一种基因编辑的方法和用途

(57)摘要

CN115820728B本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种基因编辑的方法和用途，所述方法包括利用碱基编辑系统对目的多核苷酸上的靶C碱基和/或靶A碱基脱氨基，以在目的基因编码区引入终止密码子或点突变起始密码子；所述碱基编辑系统包括：(a)融合蛋白或其变体或其编码多核苷酸，所述融合蛋白中包括Cas9片段和脱氨酶片段；(b)引导核苷酸或其编码多核苷酸，其将a)中所述融合蛋白或其变体靶向至所述靶C碱基和/或靶A碱基。所述方法通过安全高效的碱基编辑技术敲除目的基因。本发明所提供的方法可望开发成为治疗老年性黄斑变性等疾病的药物，具有广阔的临

CN115820728B

CN115820728B权利要求书1/2页

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1.一种编辑VPF基因的方法，所述方法在体外实施，其特征在于，所述方法包括利用碱基编辑系统对VPF多核苷酸上的靶C碱基和/或靶A碱基脱氨基，以在VPF基因编码区引入终止密码子或点突变起始密码子；所述碱基编辑系统包括：

(a)融合蛋白或其编码多核苷酸，所述融合蛋白中包括Cas9片段和脱氨酶片段；

(b)引导核苷酸或其编码多核苷酸，其将a)中所述融合蛋白或其变体靶向至所述靶C碱基和/或靶A碱基，所述引导核苷酸的序列选自SEQIDNo.1、SEQIDNo.3、SEQIDNO.7、SEQIDNO.10、SEQIDNO.12或SEQIDNO.14。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，引入的终止密码子为TAA,TAG或者TGA;和/或，所述起始密码子为ATG或CTG。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白选自胞嘧啶融合蛋白、腺嘌呤融合蛋白或胞嘧啶颠换融合蛋白中的一种或多种；各融合蛋白相应的所述碱基编辑系统为胞嘧啶碱基编辑系统、腺嘌呤碱基编辑系统、CGBE碱基编辑系统。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脱氨酶片段为胞嘧啶脱氨酶或腺嘌呤脱氨酶。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述胞嘧啶脱氨酶选自以下中的一个或多个：APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3D、APOBEC3F、APOBEC3G、APOBEC3H、APOBEC4、激活诱导的脱氨酶或pmCDA1;

和/或，所述腺嘌呤脱氨酶选自野生型tadA、突变型tadA,或者两者组成的复合物

wtTadA-TadA。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Cas9片段和脱氨酶片段之间通过链接肽链接。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括以下中的任一项或多