CN119823941B 一种间充质干细胞外泌体的制备方法及其应用 （博雅干细胞科技有限公司细胞科技分公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN119823941B(45)授权公告日2025.07.08

(21)申请号202510315120.9

(22)申请日2025.03.18

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN119823941A

(43)申请公布日2025.04.15

(73)专利权人博雅干细胞科技有限公司细胞科

技分公司

地址300450天津市滨海新区中新生态城

生命谷东区3号厂房102-2

(72)发明人魏卿刘庆喜肖海蓉刘冰

王芳

(51)Int.CI.

C12N5/0775(2010.01)A61K35/28(2015.01)A61P39/06(2006.01)

(56)对比文件

CN117778302A,2024.03.29CN111808809A,2020.10.23审查员王冠男

(74)专利代理机构天津合正知识产权代理有限

公司12229专利代理师马云云

权利要求书1页说明书10页附图5页

(54)发明名称

一种间充质干细胞外泌体的制备方法及其

应用

(57)摘要

CN119823941B本发明提供了一种间充质干细胞外泌体的制备方法及其应用，该方法在培养MSC细胞所使用的培养基中添加N-乙酰半胱氨酸和槲皮素，从而刺激MSC产生具有抗衰、抗凋亡作用的外泌体，并且通过逐步降低氧分压培养的方式刺激MSC产生的外泌体进一步具有抗衰功效，并且细胞在经N-乙酰半胱氨酸和槲皮素诱导培养后，可抑制其在低氧状态下产生急性氧化应激、增殖能力下降以及质量不稳定等不良影响并且不损伤细胞及外泌体相关成分的活性。该方法在体外显示出良

CN119823941B

CN119823941B权利要求书1/1页

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1.一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

S1、原代培养：

使用无血清完全培养基对脐带间充质干细胞进行原代培养，得到PO代细胞；

S2、驯化培养：

在无血清完全培养基中添加N-乙酰半胱氨酸和槲皮素配置成驯化培养基，使用驯化培养基将P0代细胞传代培养至P5代；

S3、间充质干细胞外泌体的逐步低氧分压分离提取：

继续将P5代的间充质干细胞驯化培养直至细胞融合度80%,更换为无血清基础培养基，将培养瓶置于含有5Vt%CO?和15Vt%0?的培养箱中37℃培养24小时，之后每隔24h下调4-9Vt%的0?含量，调整2-3次，吸取上清液进行梯度离心提取得到外泌体。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：N-乙酰半胱氨酸的浓度为3-7mmol/L,槲皮素的浓度为1-3μmol/L。

3.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：步骤S3中，最后一次氧气含量调整后，环境中氧气含量控制在1-5Vt%。

4.根据权利要求3所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：步骤S3中，调整2次0?含量：培养第一个24小时之后，将氧气含量调整为7-8Vt%,继续培养24小时；24小时后将氧气含量调整为2-3Vt%,继续培养24小时；共计培养72小时。

5.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：步骤S2中，每一次传代培养MSC细胞接种密度为1×10?个/cm2,在37℃、5Vt%CO?培养箱中培养，每48小时更换培养基。

6.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：步骤S3中MSC细胞接种密度为1×10?个/cm2。

CN119823941B说明书1/10页

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一种间充质干细胞外泌体的制备方法及其应用

技术领域

[0001]本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种间充质干细胞外泌体的制备方法及其

应用。

背景技术

[0002]间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，具有来源丰富，可取自骨髓、脐带、脐血、脂肪等组织，免疫原性低等优点。基于MSCs的细胞治疗已成功应用于心血管系统疾病，骨、软骨缺损，糖尿病等疾病的治疗。MSCs通过旁分泌和