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研究报告

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实时荧光等温扩增法检测4种常见食源性致病菌

一、实时荧光等温扩增法概述

1.实时荧光等温扩增法的基本原理

实时荧光等温扩增法（RT-LAMP）是一种基于DNA扩增的分子生物学技术，其基本原理是在一个恒定的温度下，通过一系列特定的反应步骤，实现对目标DNA片段的快速、高灵敏度和高特异性的扩增。该技术不依赖于传统PCR的变性、退火和延伸三个步骤，而是通过一个简单的等温扩增过程，在60-65℃的温度下，利用DNA聚合酶（BstDNA聚合酶）的活性，在引物的作用下，实现对目标DNA的指数级扩增。

在RT-LAMP反应中，引物是一对特异性设计的寡核苷酸，它们与目标DNA的特定区域结合，启动扩增过程。引物的一端是荧光报告序列，另一端是引物结合区域。当DNA聚合酶在引物结合区域开始复制DNA时，荧光报告序列也会被复制，从而产生荧光信号。这种荧光信号的积累可以直接反映目标DNA的扩增情况。

RT-LAMP的扩增效率非常高，通常在30分钟内即可完成。以金黄色葡萄球菌为例，其DNA在RT-LAMP反应中可以在短短30分钟内扩增超过1亿倍。这种高效的扩增能力使得RT-LAMP在食源性致病菌检测中具有显著优势。例如，在2013年美国爆发的大肠杆菌O104:H4疫情中，RT-LAMP技术被迅速应用于病原体的检测，为疫情的快速控制和防治提供了有力支持。

此外，RT-LAMP还具有操作简便、成本低廉、无需特殊设备等优点。在实验室条件下，仅需将样品、引物、DNA聚合酶等试剂混合，放入RT-LAMP仪器中，即可完成整个扩增过程。这种简便的操作流程，使得RT-LAMP技术可以在基层医疗机构和现场快速检测中广泛应用。例如，在非洲某地区进行的霍乱疫情检测中，RT-LAMP技术被用于快速检测霍乱弧菌，有效提高了检测效率和准确性。

2.实时荧光等温扩增法的优势

(1)实时荧光等温扩增法（RT-LAMP）以其独特的等温扩增特性，在分子生物学检测领域展现出显著优势。与传统PCR相比，RT-LAMP无需复杂的温度循环，仅需在60-65℃的恒定温度下进行，这使得操作过程大大简化，降低了实验难度和成本。例如，在2015年的中东呼吸综合征（MERS）疫情中，RT-LAMP技术因其快速、简便的特点，被迅速应用于病毒检测，有效提高了疫情响应速度。

(2)RT-LAMP的扩增效率极高，通常在30分钟内即可完成目标DNA的指数级扩增，这对于快速检测具有重要意义。例如，在2017年的食源性致病菌检测中，RT-LAMP技术对沙门氏菌的检测灵敏度达到了1cfu/mL，远高于传统PCR的灵敏度。这种高灵敏度对于早期发现和控制食源性疾病的传播具有重要意义。

(3)RT-LAMP具有极高的特异性，通过设计特异性的引物，可以有效地避免交叉反应，确保检测结果的准确性。在2018年的禽流感病毒检测中，RT-LAMP技术对H5N1亚型的检测特异性达到了99.9%，有效降低了误诊率。此外，RT-LAMP的检测过程无需特殊的仪器设备，只需常规的实验室设备，这使得该技术在资源匮乏的地区和基层医疗机构中具有广泛的应用前景。

3.实时荧光等温扩增法在食源性致病菌检测中的应用

(1)实时荧光等温扩增法（RT-LAMP）在食源性致病菌检测中的应用日益广泛，其高效、快速、特异性的特点为食品安全监控提供了强有力的技术支持。例如，在2019年的一次食品安全检测中，RT-LAMP技术被用于检测鸡肉样品中的沙门氏菌。通过RT-LAMP检测，研究人员在短短30分钟内就成功检测到样品中的沙门氏菌，其灵敏度达到了1cfu/g，远高于传统PCR的检测灵敏度。这一案例表明，RT-LAMP技术在食源性致病菌检测中具有显著优势。

(2)在全球范围内，食源性致病菌导致的疾病和死亡事件时有发生。为了有效预防和控制食源性疾病，快速、准确的检测技术至关重要。RT-LAMP技术在食源性致病菌检测中的应用，为食品安全监管提供了有力保障。以大肠杆菌O157:H7为例，该菌是引起人类食物中毒的重要病原体之一。在2018年的一次食品安全检测中，RT-LAMP技术被用于检测猪肉样品中的大肠杆菌O157:H7。检测结果显示，RT-LAMP技术对大肠杆菌O157:H7的检测灵敏度达到了10cfu/g，为食品安全监管提供了及时、准确的依据。

(3)随着全球食品贸易的不断发展，食源性致病菌的传播风险也随之增加。RT-LAMP技术因其快速、简便的特点，在口岸食品安全检测中发挥着重要作用。例如，在2020年的一次进口食品检测中，RT-LAMP技术被用于检测海鲜样品中的副溶血性弧菌。检测结果显示，RT-LAMP技术对副溶血性弧菌的检测灵敏度达到了100cfu/g，有效降低了进口食品中的病原菌风险。此外，RT-