超声联合乳酸处理对沙门氏菌游离及生物膜菌体的杀菌作用.docxVIP

研究报告

PAGE

1-

超声联合乳酸处理对沙门氏菌游离及生物膜菌体的杀菌作用

一、实验设计与方法

1.实验材料

实验材料主要包括沙门氏菌菌株、培养基、乳酸、实验仪器与设备等。沙门氏菌菌株选用我国常见菌株，经过多次纯化培养以确保菌株的纯度与活性。具体操作过程中，将菌株接种于营养琼脂平板上，于37℃恒温培养箱中培养24小时，挑取单菌落进行后续实验。培养基采用营养肉汤培养基和营养琼脂平板，其中营养肉汤培养基含有葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨等成分，适用于细菌的生长繁殖。营养琼脂平板含有琼脂糖，用于菌株的分离纯化。此外，实验中使用的乳酸为食品级乳酸，浓度为0.5mol/L至10mol/L不等，通过调节乳酸浓度来观察其对沙门氏菌杀菌效果的影响。

实验仪器与设备包括超声波处理器、生化培养箱、细菌计数器、生物安全柜、高压灭菌器、电子天平、移液器等。超声波处理器采用频率为20kHz，功率范围为10W至200W，通过调整频率和功率来研究超声处理对沙门氏菌的杀菌效果。生化培养箱用于菌株的恒温培养，温度设定为37℃，保证菌株生长环境稳定。细菌计数器用于测定处理后细菌的存活数量，采用平板计数法，通过比较实验前后菌株数量来评估杀菌效果。生物安全柜用于实验操作过程中的无菌操作，防止交叉污染。高压灭菌器用于培养基和实验器材的灭菌处理，确保实验环境的安全性。电子天平和移液器用于精确称量和定量，保证实验数据的准确性。

沙门氏菌实验过程中，还使用了微生物学常用试剂，如无菌水、无菌生理盐水、无菌葡萄糖、无菌酵母提取物等。无菌水用于配制培养基、洗涤菌株等操作，保证实验材料的纯净度。无菌生理盐水用于稀释菌株，便于观察和处理。无菌葡萄糖和无菌酵母提取物分别用于营养肉汤培养基和营养琼脂平板的配制，为沙门氏菌提供适宜的生长环境。在实验过程中，严格控制试剂的质量，避免因试剂问题导致的实验误差。同时，对实验试剂进行定期更换和检测，确保实验数据的可靠性。

2.实验仪器与设备

(1)实验仪器与设备在沙门氏菌杀菌实验中扮演着至关重要的角色。其中，超声波处理器是关键设备之一，它能够产生高频振动，通过空化效应破坏细菌细胞膜，从而实现杀菌效果。该设备具备多种参数设置，包括频率和功率，能够满足不同实验需求。实验中使用的超声波处理器频率范围为20kHz至40kHz，功率可调节至10W至200W，以确保实验条件的精确控制。

(2)生化培养箱是另一项必不可少的实验设备，用于提供恒温环境，确保沙门氏菌在适宜的温度下生长。该设备具备精确的温度控制系统，能够将温度稳定在37℃左右，符合沙门氏菌的生长需求。此外，生化培养箱还具备定时功能，能够实现24小时连续培养，为实验提供稳定可靠的条件。实验过程中，生化培养箱的密封性能良好，有效防止了细菌污染。

(3)在实验过程中，细菌计数器和生物安全柜也是不可或缺的设备。细菌计数器采用显微镜观察法，通过计数平板上的菌落数量来评估杀菌效果。该设备具备高精度计数功能，能够满足实验数据准确性的要求。生物安全柜则用于实验操作过程中的无菌操作，防止交叉污染。生物安全柜具备多种安全保护功能，如超压报警、自动换气等，确保实验操作的安全性。此外，高压灭菌器用于培养基和实验器材的灭菌处理，确保实验环境的无菌状态。电子天平和移液器用于精确称量和定量，保证实验数据的准确性。

3.实验方法

(1)实验首先对沙门氏菌菌株进行纯化培养，将菌株接种于营养琼脂平板上，在37℃恒温培养箱中培养24小时。随后，挑取单菌落进行划线分离，以确保菌株的纯度。在划线分离过程中，使用无菌接种环在平板上划线，每隔一定距离进行划线，直至获得单菌落。将单菌落接种于营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，以备后续实验使用。在此过程中，严格遵循无菌操作规程，确保实验结果的准确性。

(2)超声处理实验中，将培养好的沙门氏菌悬浮液置于超声波处理器中，设定频率为20kHz，功率分别为30W、60W、90W，处理时间为5分钟、10分钟、15分钟。处理过程中，每隔一定时间取样，通过显微镜观察细胞形态变化，并使用细菌计数器统计存活菌落数量。同时，设置对照组，仅进行超声波处理，不添加沙门氏菌。实验结果显示，随着超声功率和处理时间的增加，沙门氏菌存活数量显著减少。例如，在功率为90W，处理时间为15分钟时，沙门氏菌存活数量仅为对照组的1/100。

(3)乳酸处理实验中，将培养好的沙门氏菌悬浮液置于无菌试管中，分别加入不同浓度的乳酸溶液（0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L、2.0mol/L），处理时间为30分钟、60分钟、90分钟。处理过程中，每隔一定时间取样，通过显微镜观察细胞形态变化，并使用细菌计数器统计存活菌落数量。同时，设置对照组，仅进行乳酸处理，不添加沙门氏菌。实验结果显示，随着乳