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胰蛋白酶保护金纳米团簇的制备及其在含硫化合物检测中的应用研究

一、绪论

1.1研究背景与意义

纳米材料被赞誉为“21世纪最有前途的材料”，自19世纪60年代胶体微粒成功研制，便开启了纳米材料的研究历程。到20世纪80年代，德国教授成功制备出由粒径6nm金属铁粉原位加压而成的世界上第一块纳米材料，此后纳米材料在物理学、化学、环境学、医学等诸多领域广泛涉足。金纳米团簇作为金属纳米团簇的典型代表，是一种以有机单分子为模板制备的具有荧光性质的分子级别聚集体，其尺寸与费米波长相近，能产生特定能级分离，可在一定波长激发下发射荧光，在成像、发光材料、探测设备、生物以及医学等领域应用广泛。

金纳米团簇的制备方法多样，主要包括直接合成法、配体刻蚀法和反伽伐尼还原法。直接合成法利用金纳米团簇在不同溶剂中溶解度的差异来分离杂质以提纯，为获取单晶结构奠定基础，如2007年有学者通过控制温度和还原剂加入速度等改进该方法，成功制备出大小均匀、产率高的[Au25（SR）18]。配体刻蚀法制备时主要合成Au38，先以GSH为配体利用直接合成法得到Au-SG前驱体，再用硼氢化钠还原，洗净杂质后用过量苯乙硫醇在高温下除去黑色产物得到最终产物，有学者借助紫外-可见吸收光谱仪和基质辅助激光解吸电离质谱仪器来观测这一过程中金纳米团簇尺寸集中的变化。反伽伐尼还原法，因其反应过程与伽伐尼还原相反得名，伽伐尼还原是电化学性质活泼的金属还原离子状态不活泼的金属，而金纳米团簇的反应与之逆向。

含硫化合物在环境和生物体系中广泛存在，硫化物在工业生产中应用频繁，如在造纸、皮革、化工等行业大量使用，排放到环境中会对水体和土壤造成污染，危害生态环境和人类健康，还会产生难闻气味，影响空气质量。生物体内的含硫生物小分子，如半胱氨酸、谷胱甘肽等，参与众多重要生理过程，如抗氧化防御、蛋白质和DNA合成等，其含量异常与多种疾病相关，如半胱氨酸含量异常与神经系统疾病、心血管疾病有关，谷胱甘肽水平变化反映细胞氧化还原状态，与癌症、糖尿病等疾病相关。准确检测含硫化合物对于环境监测、疾病诊断和生物医学研究意义重大。

目前含硫化合物检测方法众多，传统的有分光光度法、色谱法、电化学法等。分光光度法操作简便，但灵敏度和选择性欠佳；色谱法分离效率高、分析速度快，设备昂贵、操作复杂；电化学法灵敏度高、响应速度快，电极易受污染、稳定性差。因此开发高灵敏度、高选择性、简便快速的含硫化合物检测方法是当前研究热点和重点。

胰蛋白酶保护金纳米团簇用于含硫化合物检测具有独特优势和重要意义。胰蛋白酶由多种氨基酸构成，侧链含多个氨基、羧基和巯基等有机官能团，有潜在配位能力，能作为还原剂和保护剂原位合成荧光纳米材料，且制备过程绿色环保、条件温和、易于重复。胰蛋白酶保护金纳米团簇在含硫化合物检测中，可利用其与含硫化合物之间的特异性相互作用，基于荧光信号变化实现对含硫化合物的高灵敏检测。以硫化钠检测为例，当体系中存在硫化钠时，硫化钠中的硫离子会与金纳米团簇表面的金原子发生相互作用，改变金纳米团簇的电子结构和荧光性质，使荧光强度发生变化，通过检测荧光强度变化即可实现对硫化钠的定量检测。这种检测方法灵敏度高、选择性好，能为含硫化合物检测提供新途径和方法，对环境科学、生物医学等领域发展有积极推动作用。

1.2国内外研究现状

在金纳米团簇制备方面，国内外研究取得诸多成果。国外有学者通过直接合成法，精确控制反应条件，制备出尺寸均一、性能优异的金纳米团簇，并深入研究其形成机理和生长动力学。在配体刻蚀法研究中，国外团队利用先进表征技术，如高分辨透射电子显微镜（HRTEM）、X射线光电子能谱（XPS）等，详细解析金纳米团簇在刻蚀过程中的结构演变和表面化学状态变化，为优化制备工艺提供理论依据。国内研究人员则在反伽伐尼还原法基础上进行创新，引入新型还原剂和配体，成功制备出具有特殊结构和性能的金纳米团簇，拓展其在催化、传感等领域应用。例如，国内某研究组通过调整反伽伐尼还原法中反应体系的酸碱度和反应时间，制备出荧光性能增强的金纳米团簇，用于生物分子检测，取得良好效果。

在含硫化合物检测领域，国外学者开发出多种基于纳米材料的新型检测技术。有团队利用量子点与含硫化合物之间的荧光共振能量转移（FRET）效应，实现对含硫生物小分子的高灵敏检测，检测限达到纳摩尔级别。还有研究人员基于纳米酶的催化活性，构建酶联免疫吸附测定（ELISA）-纳米酶检测体系，用于环境水样中硫化物检测，提高检测灵敏度和选择性。国内研究人员则聚焦于开发简单、快速、低成本的检测方法。有团队利用比色法原理，设计合成对含硫化合物具有特异性识别能力的纳米探针，通过肉眼观察溶液颜色变化实现对含硫化合物的快速定性检测，该方法操作简便，适用于