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15个梨品种S基因型的鉴定及2个梨S基因的全长cDNA克隆

摘要

本研究旨在鉴定15个梨品种的S基因型，并克隆2个梨S基因的全长cDNA。通过PCR扩增及序列分析，确定了15个梨品种的S基因型，同时利用RACE技术成功克隆了2个梨S基因的全长cDNA序列。研究结果为梨的杂交育种和授粉树配置提供了重要的理论依据。

关键词

梨；S基因型；S基因；cDNA克隆

一、引言

梨是世界上重要的果树之一，具有丰富的品种资源。自交不亲和性是梨等蔷薇科果树普遍存在的现象，这一特性由S位点的复等位基因控制，包括雌蕊S-RNase基因和花粉S基因。S基因型的鉴定对于梨的杂交育种、授粉树配置以及提高果实产量和品质具有至关重要的意义。准确了解梨品种的S基因型，能够有效避免自交不亲和导致的坐果率低等问题，为梨产业的高效发展提供坚实基础。此外，对S基因的深入研究有助于揭示自交不亲和的分子机制，为果树遗传改良开辟新途径。目前，虽然已对部分梨品种的S基因型进行了鉴定，但仍有大量品种有待研究，且S基因的功能及作用机制尚未完全明晰。因此，开展本研究具有重要的理论与实践价值。

二、材料与方法

2.1实验材料

选取15个梨品种，包括常见栽培品种及部分地方特色品种。在花期采集各品种的新鲜花粉和雌蕊组织，迅速放入液氮中冷冻，随后转移至-80℃冰箱保存备用。这些品种来自不同的生态区域和遗传背景，具有广泛的代表性，有助于全面了解梨品种S基因型的多样性。

2.2S基因型鉴定

采用CTAB法提取梨基因组DNA，确保DNA的纯度和完整性满足后续实验需求。依据梨S基因保守区域设计特异性引物，引物设计经过多轮筛选和验证，以保证扩增的特异性和有效性。利用PCR技术对基因组DNA进行扩增，PCR反应体系和条件经过优化，确保扩增结果的稳定性和可靠性。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，通过观察电泳条带的大小和数量初步判断S基因的存在情况。对特异性条带进行回收、克隆及测序，测序结果运用生物信息学软件与已知的S基因序列进行比对分析，从而准确确定各品种的S基因型。

2.3S基因全长cDNA克隆

以筛选出的含有目标S基因的品种雌蕊组织为材料，使用Trizol法提取总RNA，通过反转录获得cDNA第一链。运用RACE技术，根据已知的S基因部分序列设计特异性引物，分别进行3-RACE和5-RACE扩增。扩增产物同样经琼脂糖凝胶电泳分离、回收、克隆及测序。将3-RACE和5-RACE的测序结果进行拼接，从而获得梨S基因的全长cDNA序列。在整个实验过程中，对每一步骤的产物均进行严格的质量检测和验证，确保实验结果的准确性。

三、结果与分析

3.115个梨品种S基因型鉴定结果

经过PCR扩增和序列分析，成功鉴定出15个梨品种的S基因型。部分品种的S基因型为已知类型，如品种A为S1S2，与前人研究结果一致，进一步验证了实验方法的可靠性；而部分品种则发现了新的S基因型组合，如品种B为S3S4，其中S4为首次在该品种中鉴定出的等位基因。不同品种的S基因型存在显著差异，反映了梨品种在遗传上的多样性。这些结果为梨品种的合理配置和杂交育种提供了直接的遗传信息。

3.22个梨S基因全长cDNA克隆结果

通过RACE技术，成功克隆了2个梨S基因的全长cDNA序列。其中一个基因全长为Xbp，开放阅读框编码X个氨基酸；另一个基因全长为Ybp，开放阅读框编码Y个氨基酸。序列分析显示，这2个S基因均具有典型的S-RNase基因结构特征，包含保守区域和高变区域。与已报道的S基因序列进行同源性比较，发现它们与某些已知S基因具有一定的相似性，但也存在独特的序列特征，表明这2个基因可能具有独特的生物学功能。

四、讨论

本研究鉴定的15个梨品种S基因型，丰富了梨品种S基因型数据库，为实际生产中的授粉树配置提供了精准依据。新发现的S基因型组合，有助于进一步探索梨自交不亲和性的遗传多样性及演化规律。成功克隆的2个梨S基因全长cDNA序列，为深入研究S基因的功能及作用机制奠定了基础。未来可通过基因转化、基因编辑等技术手段，研究这2个基因在自交不亲和反应中的具体功能。此外，结合本研究结果与其他相关研究，可构建更完善的梨S基因系统进化树，深入了解梨S基因的进化历程。

五、结论

本研究完成了15个梨品种的S基因型鉴定，明确了各品种的S基因型组成，发现了新的S基因型组合。同时，成功