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第二章细胞生物学研究方法

细胞生物学以细胞为研究对象，从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平三个层

次，以动态的观点研究细胞和细胞器结构和功能、细胞生活史和各种生命活动。因此需

要各种技术和方法才能对细胞进行深入研究。

1、显微成像技术

原理：照明系统发出的光线或通过样品时，与样品发生相互作用，光线或

被改变的特征被肉眼观察或通过显像板检测而成像。

分辨率：r=0.61λ/nsinα；分辨极限：一定波长的射线不能用以探测比它本身波长短

得多的结构细节。

①常用的光学显微镜

普通双筒显微镜

荧光显微镜：利用紫外线为光源照射样品，使之发生荧光。

相差显微镜：将不同成分的衍射系数改变为明暗变化。

暗视野显微镜：利用散射或衍射光增大反差。

倒置显微镜：普通光学显微镜的倒置。

光学显微镜的样品：固定（杀死细胞，稳定细胞的成分，硬化样品）、包埋和切片、

染色。

性自显影：用感光胶片测定细胞内某种被性标记的物质在细胞固定时所在的位

置。

②电子显微镜

透射电子显微镜：照明系统为，电磁透镜调整的亮度与聚焦，真空系统保

护电子枪等。

扫描电子显微镜：极狭窄扫描样品，利用样品表面形成的二次电子信号成像。

扫描透射电子显微镜：透射电子显微镜与扫描电子显微镜的结合（扫描，透射电

子成像）。

高压电子显微镜：与透射电子显微镜基本相同，只是电压特别高，大大减小畸变

的可能。

电子显微镜的样品：

步骤：固定、包埋、切片（超薄切片）、染色（负染色等）、观察（放在载网上）

负染色：利用重金属盐对样品进行染色，电子密度高的重金属盐包埋了样品中低电子密

度的背景，增强了背景散射电子的能力以提高反差。

喷镀技术：以一定角度在样品的表面镀上一层金属，增强背景和待观察样品反差的方法。冷

冻断裂复型和冷冻蚀刻：生物样品在液氮中迅速冷冻，然后迅速放入冷冻装置中，并迅

速抽成真空，用冰刀切割，然后观察切口表面；或将其温度稍微升高，使样品中的冰

升华，会在表面浮雕出细胞膜的超微结构。

③间接成像技术

扫描隧道显微镜：利用量子力学的隧道效应，探针尖端与样品表面可产生隧道电流，其

值与距离呈指数变化关系。特点是分辨率高，可得到立体三维结构，对样品没有损伤，

扫描速度快，体积小，携带方便。

原子力显微镜：扫描隧道显微镜修改，利用探针原子与样品表面的原子力的变化。

X射线衍射技术：在原子分辨的水平上推测分子的结构。

2、细胞化学技术

①酶细胞化学技术

酶反应：细胞内酶作用于底物产生初级反应产物。

捕捉反应：初级反应产物与捕捉剂相互作用，产生显微镜下可见的最终反应产物。

②免疫细胞化学技术

利用免疫反应定位组织或细胞中的抗原成分分布。分为免疫荧光技术和免疫电镜技术。

③其它细胞化学技术

显微分光光度术及显微荧光光度术用来对相关成分进行定性、定量、分布的观察。核磁

技术分析有机化合物结构。

3、细胞分选技术

流式细胞仪：激光光源、流室、讯号检测器、讯号分析部件

细胞分选：细胞液经流室形成单细胞悬液，激光检测带有荧光标记的细胞，信号检测分

析使液滴充电，经电场分选进入无细胞液滴收集器。

分选：与细胞分选类似，不同之处在于，要用带有荧光标记的探针同特异染

色体结合，使待分选的带上标记。

4、细胞工程技术

①细胞培养：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体取出的细胞。

培养条件：注意三个环节：营养、环境、的排除。

培养过程：原代细胞培养产生细胞系，再经传代培养得到具有特殊性质或标志的细胞株。培养

方法：悬浮培养、贴壁培养。

②细胞融合与单克隆抗体技术

细胞融合技术：自发或人工诱导（聚乙二醇等），使两个不同型的细胞或原生

融合形成一个细胞。

单克隆抗体技术：B细胞与突变的骨髓细胞发生细胞融合，产生既能产生单