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生物药物分离技术第二组2012年10月11日

概述1目录核酸类药物分离2主要品种的分离纯化工艺简介3核酸类药物的纯化技术的进展4

概述1反义核酸：是指能与特定mRNA精确互补、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子。反义核酸技术：利用核酸特异地封闭某些基因表达，使之低表达或不表达的技术它包括反义RNA技术、反义DNA技术和核酶（ribozymes）技术三大技术。

概述反义核酸来源：一是利用固相亚磷酰胺法人工合成的短小反义寡聚核苷酸（AON).二是更具实用用价值的人工表达载体。包括单个基因和多个基因的联合反义表达载体。三是天然存在的反义核酸分子。1

概述1什么是反义RNA?2什么是反义DNA?1

概述反义核酸的作用机制：反义核酸作用原理基于碱基配对规则，可通过与靶RNA进行碱基配对结合的方式参与对相关基因表达的调控。其作用方式可能有：①反义RNA与mRNA结合形成互补双链阻断核糖核蛋白体同mRNA的结合，从而抑制了mRNA翻译成蛋白质的过程。②反义DNA能与靶细胞形成一种三链核酸(triplehelixnucleicacid),它通过作用于控制基因转录的转录子、增强子和启动子区，对基因的转录进行调控。③反义核酸与mRNA的结合可阻挡mRNA向细胞质的运输。④反义核酸与mRNA结合后使得mRNA更加易被核酸酶识别而降解，从而大大缩短mRNA的半衰期。5抑制转录后mRNA的加工修饰上述四种作用途径都可表现为对基因表达的抑制或调节，且这种调节是非常特异性的1

概述1

概述反义RNA的作用机制Ⅰ类:这类反义RNA直接作用于其靶mRNA的SD序列和或编码区，引起翻译的直接抑制(ⅠA类)或与靶mRNA结合后引起该双链RNA分子对RNA酶Ⅲ的敏感性增加，使其降解(ⅠB类)。Ⅱ类:这类反义RNA与mRNA的SD序列的上游非编码区结合，从而抑制靶mRNA的翻译功能。其作用机制尚不完全清楚，可能是反义RNA与靶mRNA的上游序列结合后会引起核糖体结合位点区域的二级结构发生改变，因而阻止了核糖体的结合。Ⅲ类:这类反义RNA可直接抑制靶mRNA的转录1

概述

概述核酶：是具有催化功能的RNA分子，是生物催化剂，可降解特异的mRNA序列。核酶又称核酸类酶、酶RNA核酶1

概述剪切型核酸：锤头核酶发夹核酶HDV核酶RNaseP1

概述1反义核酸的作用特点：反义核酸作为基因治疗药物之一，与传统药物相比具有诸多优点。1)高度特异性：反义核酸药物通过特异的碱基互补配对作用于靶RNA或DNA，犹如“生物导弹”。2)高生物活性、丰富的信息量；反义核酸是一种携带特定遗传信息的信息体，碱基排列顺序可千变万化，不可穷尽。3)高效性：直接阻止疾病基因的转录和翻译。4)最优化的药物设计：反义核酸技术从本质上是应用基因的天然顺序信息，实际上是最合理的药物设计。5)低毒、安全：反义核酸尚未发现其有显著毒性，尽管其在生物体内的存留时间有长有短，但最终都将被降解消除，这避免了如转基因疗法中外源基因整合到宿主染色体上的危险性。6）免疫原性低，很少引起免疫反应

概述1：空间结构2：尽量不与人基因组不同源3：稳定性1

1概述反义药物的特点：靶基因mRNA序列已知反义寡核苷酸与靶基因特异性结合而调节基因表达天然的寡核苷酸难以进入细胞，难直接用于治疗。核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA)直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白质，诱导宿主产生对该抗原蛋白质的免疫应答以达到防病治病的目的。1

概述1RNA干涉技术（RNAi）定义：RNA干扰（RNAinterference,RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定