CN118284693A 突变体文库池制作方法 （花王株式会社）.pdfVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN118284693A

(43)申请公布日2024.07.02

(21)申请号202280077470.0(74)专利代理机构北京尚诚知识产权代理有限

公司11322

(22)申请日2022.11.21

专利代理师龙淳沈央

(30)优先权数据

(51)Int.Cl.

2021-1890962021.11.22JP

C12N15/10(2006.01)

(85)PCT国际申请进入国家阶段日

C12Q1/02(2006.01)

2024.05.22

C40B40/06(2006.01)

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/JP2022/0429892022.11.21

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2023/090441JA2023.05.25

(71)申请人花王株式会社

地址日本

(72)发明人日置贵大寺井三佳川原彰人

权利要求书2页说明书15页

序列表（电子公布）附图2页

(54)发明名称

突变体文库池制作方法

(57)摘要

本发明提供低价、简便地制作多样性高的突

变文库池的方法。包括以下的工序(a)～(c)的突

变文库池的制作方法：(a)使用模板DNA和多种突

变导入用引物对，对每对该突变导入用引物对利

用DNA聚合酶进行DNA合成反应，获得具有5’突出

末端的DNA片段的工序，其中，该突变导入用引物

对与该模板DNA进行退火，具有相互互补的区域，

并且在至少一方包含突变导入部位；(b)使DNA连

接酶作用于工序(a)中所得到的DNA片段的工序；

和(c)用工序(b)中所得到的DNA对宿主细胞进行

转化的工序。

A

3

9

6

4

8

2

8

1

1

N

C

CN118284693A权利要求书1/2页

1.一种突变文库池的制作方法，其中，

包括以下的工序(a)～(c)：

(a)使用模板DNA和多种突变导入用引物对，对每对该突变导入用引物对利用DNA聚合

酶进行DNA合成反应，获得具有5’突出末端的DNA片段的工序，其中，该突变导入用引物对与

该模板DNA进行退火，具有相互互补的区域，并且在至少一方包含突变导入部位；

(b)使DNA连接酶作用于工序(a)中所得到的DNA片段的工序；和

(c)用工序(b)中所得到的DNA对宿主细胞进行转化的工序。

2.如权利要求1所述的方法，其中，

使用10种以上的突变导入用引物对。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，

所述模板DNA是碱基序列的一部分不同的多种DNA的混合物。

4.如权利