多肽功能化亲和微球的制备与线粒体高选择性分离分析.pdfVIP

２０２４年６月Ｖｏｌ．４２Ｎｏ．６

Ｊｕｎｅ２０２４ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ５５５～５６３

研究论文ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０２４．０１０１３

多肽功能化亲和微球的制备与线粒体高选择性分离分析

１，２１，２１，２１，２∗１，２∗

陈建，徐坤，高涵，赵睿，黄嫣嫣

（１．北京分子科学国家研究中心，中国科学院化学研究所，中国科学院活体分析化学重点实验室，

北京１００１９０；２．中国科学院大学，北京１０００４９）

摘要：线粒体作为细胞物质和能量代谢的主要细胞器，在维持细胞生理稳态中发挥关键作用，进而与诸多疾病的发

生发展密切相关。从高度复杂的细胞组分中特异性分离分析线粒体，对于其功能解析、分子机制研究和化学干预

具有重要意义，但仍存在困难与挑战。本研究以靶向多肽为识别元件，开展了线粒体亲和分离新材料的设计、合成

和分析应用研究。以与线粒体膜具有特异性相互作用的线粒体穿透肽（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇｐｅｐｔｉｄｅ，ＭＰＰ）

为识别元件，通过引入空间手臂分子，设计合成了多肽亲和配基。以表面富含醛基的聚合物基质微球（ｍａｔｒｉｘ

ｂｅａｄｓ，ＭＢ）为亲和基质，建立了基于胺甲基化反应的多肽功能化亲和微球制备方法，该方法具有修饰反应条件温

和、配基修饰效率高的特点。将所构建的亲和微球ＭＢ＠ＭＰＰ用于细胞破碎液中线粒体的直接分离，实现了完整

线粒体的快速、高选择性和无损捕获。与商品化分离试剂盒相比，ＭＢ＠ＭＰＰ捕获的线粒体中标志蛋白富集效率更

高，纯度更好。基于多肽功能化微球对线粒体高选择性分离能力，以线粒体代谢所需关键辅酶的前体小分子色氨

酸和核黄素为目标，进一步建立了基于液相色谱⁃串联质谱的线粒体中活性小分子的分析检测方法，实现了激酶激

动剂刺激前后线粒体中活性小分子含量及其动态变化分析，为线粒体功能解析和相关疾病分子机制研究提供了方

法基础。

关键词：多肽；亲和识别；分离材料；线粒体；复杂体系；液相色谱⁃串联质谱

中图分类号：Ｏ６５８文献标识码：Ａ

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐｅｐｔｉｄｅ⁃ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｅｒｉａｌｓｆｏｒ

ｔｈｅｈｉｇｈｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｃａｐｔｕｒｅａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ

１，２１，２１，２１，２∗１，２∗

ＣＨＥＮＪｉａｎ，ＸＵＫｕｎ，ＧＡＯＨａｎ，ＺＨＡＯＲｕｉ，ＨＵＡＮＧＹａｎｙａｎ

（１．ＢｅｉｊｉｎｇＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＣＡＳＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙｆｏｒ

ＬｉｖｉｎｇＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９０，Ｃｈｉｎａ；

２．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４９，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｐｅｒｆｏｒｍｖａｒｉｏｕｓｍｅｔａｂｏｌｉｃｐｒｏｃｅｓｓｅｓｔｈａｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆ