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《化学品哺乳动物红细胞Pig-a基因突变试验方法》标准立项与发展报告

EnglishTitle:StandardizationDevelopmentReporton*Chemicals—InVivoMammalianErythrocytePig-aGeneMutationAssay*

摘要

随着全球化学品生产与使用的日益广泛，对其潜在遗传毒性进行准确、高效的安全评估已成为保障人类健康与生态环境安全的重大课题。传统的遗传毒性测试组合虽已成熟，但存在体外试验预测性过高、体内传统试验（如微核试验）通量较低等局限性。在此背景下，基于流式细胞术的体内*Pig-a*基因突变试验作为一种新兴的、高通量的体内基因突变检测方法，因其能够直接反映在完整生理环境下化学品的致突变潜能而受到国际广泛关注。本报告旨在系统阐述国家标准《化学品哺乳动物红细胞Pig-a基因突变试验方法》的立项背景、核心价值、技术内容及其标准化意义。报告详细分析了该标准制定的目的与必要性，明确了其适用范围，并深入解读了其主要技术内容，包括试验原理、验证要求、标准化操作流程及数据报告规范。本标准的制定与实施，将填补我国在该领域标准化的空白，为化学品遗传毒性风险评估提供一项与国际接轨、科学可靠且高效实用的标准化工具，有力支撑我国化学品安全管理、新药研发以及符合国际监管要求的测试数据互认，具有重要的科学价值、管理价值和产业应用价值。

关键词

化学品安全评估；遗传毒性；*Pig-a*基因突变试验；体内试验；标准化；流式细胞术；致突变性；风险评估

Keywords:ChemicalSafetyAssessment;Genotoxicity;*Pig-a*GeneMutationAssay;InVivoAssay;Standardization;FlowCytometry;Mutagenicity;RiskAssessment

正文

一、立项背景与目的意义

化学品的遗传毒性是评估其潜在致癌性和生殖细胞突变风险的核心指标，是各国化学品及药品注册法规中强制性安全评价的重要组成部分。当前国际通用的遗传毒性测试策略通常遵循“分层测试”原则，即先进行一系列体外试验筛选，再对阳性物质进行体内试验验证。然而，传统的体内基因突变试验（如转基因rodent突变试验）存在成本高、周期长、操作复杂等缺点，而体内染色体损伤试验（如微核试验）虽广泛应用，但无法直接检测基因点突变。

在此背景下，哺乳动物红细胞*Pig-a*（磷脂酰肌醇聚糖A类）基因突变试验应运而生，并迅速发展成为遗传毒理学领域的一项突破性技术。*Pig-a*基因在哺乳动物中高度保守，其编码的蛋白是糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白合成途径中的关键酶。该基因的失活突变会导致细胞表面GPI锚定蛋白（如CD59、CD24）缺失。在红细胞系统中，这一表型变化可以通过高灵敏度的流式细胞术进行快速、定量检测。

申请立项的国家标准项目《化学品哺乳动物红细胞Pig-a基因突变试验方法》，旨在建立一套规范、统一的通过测定哺乳动物红细胞*Pig-a*基因突变频率来评估化学品致突变性的标准化试验方法。其立项具有深远的目的与意义：

1.弥补现有体内遗传毒性测试体系的不足：相较于体外试验，*Pig-a*试验在评估化学物质致突变性方面更具生理相关性。其核心优势在于能够真实、完整地反映生理环境对诱变反应的综合影响。这包括受试物在暴露部位（如经口、吸入、皮肤）的吸收效率、通过体循环的系统性分布、复杂的体内代谢转化机制（活化与解毒），以及生物体自身的DNA修复过程和细胞凋亡等动态调控网络。因此，该试验能更准确地模拟人体实际暴露场景下的生物学效应。

2.作为体外试验结果的关键验证与补充工具：*Pig-a*试验可作为体外遗传毒性初筛阳性结果的重要体内验证工具。它能够帮助区分体外假阳性（如由过高浓度或非生理条件引起）与真实的体内致突变风险，从而深入揭示化学品的潜在遗传毒性本质，避免因体外假阳性导致有价值化学品的不必要淘汰，为风险管理决策提供更可靠的依据。

3.推动高通量、低成本体内测试技术的发展：该试验依托于流式细胞术，可实现对数以万计红细胞的快速分析，具有高通量、自动化程度高、所需样品量少、终点客观定量等特点。相较于传统体内突变试验，它能显著提高测试效率，降低动物使用成本和实验周期，符合动物福利“3R”原则（减少、优化、替代）中的“优化”要求。

4.促进国际技术接轨与数据互认：经济合作与发展组织（OECD）已于2014年将*Pig-a*试验纳入其测试指南草案的审议，并持续推动其成为正式指南（如OECDTG490）。我国抢先制定并发布此项国家标准，将确保国内检测机构、研发企业和监管部门能够采用与国际同步