CN114040979A 稳定地保持外源基因的人工重组rna病毒的制作方法 （国立大学法人大阪大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(43)申请公

(10)申请公布号CN114040979A布日2022.02.11

(21)申请号202080045560.2

(22)申请日2020.06.19

(30)优先权数据

2019-1155322019.06.21JP

(85)PCT国际申请进入国家阶段日2021.12.21

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/JP2020/0241312020.06.19

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2020/256099JA2020.12.24

(71)申请人国立大学法人大阪大学地址日本大阪府

(72)发明人小林刚金井祐太

(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002

代理人张晶谢顺星

(51)Int.CI.

C12N15/86(2006.01)

权利要求书1页说明书18页序列表15页附图14页

(54)发明名称

稳定地保持外源基因的人工重组RNA病毒的制作方法

(57)摘要

本发明提供一种稳定地表达外源基因的人工重组RNA病毒的制作方法，其特征在于，包括：

CN114040979A(1)获取外源基因的工序，所述外源基因具有以近似于RNA病毒基因的密码子组成的方式发生了改变的密码子组成；(2)将在(1)中获取的外源基因插入到RNA

CN114040979A

CN114040979A权利要求书1/1页

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1.一种稳定地保持外源基因的人工重组RNA病毒的制作方法，其特征在于，包括：

(1)获取外源基因的工序，所述外源基因具有以近似于RNA病毒基因的密码子组成的方式发生了改变的密码子组成；

(2)将在(1)中获取的外源基因插入到RNA病毒的基因组中的工序；及，(3)使用反向遗传学方法人工合成人工重组RNA病毒的工序。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，RNA病毒为属于呼肠孤病毒科的病毒。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，

属于呼肠孤病毒科的病毒为属于轮状病毒属或正呼肠孤病毒属的病毒。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，

在工序(1)中，获取具有改变至RNA病毒基因的密码子组成±30%的范围内的密码子组成的外源基因。

5.一种稳定地保持导入到使用反向遗传学方法人工合成的人工重组RNA病毒中的外源基因的方法，其特征在于，

使外源基因的密码子组成近似于RNA病毒基因的密码子组成。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，RNA病毒为属于呼肠孤病毒科的病毒。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，

属于呼肠孤病毒科的病毒为属于轮状病毒属或正呼肠孤病毒属的病毒。

8.根据权利要求5～7中任一项所述的方法，其中，

使外源基因的密码子组成在RNA病毒基因的密码子组成±30%的范围内与RNA病毒基因的密码子组成近似。

CN114040979A说明书1/18页

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稳定地保持外源基因的人工重组RNA病毒的制作方法

技术领域

[0001]本发明涉及一种稳定地保持外源基因的人工重组RNA病毒的制作方法。

背景技术

[0002]属于呼肠孤病毒科的轮状病毒可引发婴幼儿的急性胃肠炎，每年约有20万人因感染轮状病毒而死亡。在轮状病毒方面，人工制作任意病毒的技术开发落后，然而最近本申请的发明人成功开发出了实用的轮状病毒的人工合成方法(专利文献1、非专利文献1)。通过该技术，能够自由制作具有任意突变的人工重组轮状病毒、或带有外源基因的人工重组轮状病毒。然后，本申请的发明人发现，在导入了外源基因的人工重组轮状病毒中，全长的外源基因会在短期内消失，即难以长期稳定地保持或表达外源基因，在经过反复研究后发表了用于稳定地保持或表达外源基因的一些改良方法的报告(非专利文献2)。

[0003]在异源宿主中表达外源基因时，出于提高外源基因的表达的目的，从很久以前开始就一直采用使外源基因的密码子组成接近于宿主基因的密码子组成的密码子优化技术(非专利文献3),并提供了大量的密码子优化软件。然而，密码子优化技术能否应用于稳定地保持导入于人工重组RNA病毒中的外源基因是未知的。

现有技术文献

专利文献

[0004]专利文献1:国际公开WO2018/062199非