印迹技术及其应用：核酸杂交与探针技术综述.pdfVIP

印迹技术

一、核酸杂交（nucleicacidhybridization）

在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA

放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在

不同的分子之间形成杂化双链。

二、印迹技术和探针技术

（一）印迹技术

利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子转移到NC等各种膜上，使之成为固

相化分子。

这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因此称之为“blotting”，译为印

迹技术。

（二）探针技术

探针指的是带有放射性核素、生物素或荧光物质等可检测标志物的核酸片段，它

具有特定的序列，能够与待测的核酸片段依据碱基互补原理结合，因此可以用于

检测核酸样品中存在的特定核酸分子。核酸探针既可以是人工合成的寡核苷酸片

段，也可以是基因组DNA片段、cDNA全长或片段，还可以是RNA片段。

三、印迹技术的种类

（一）DNA印迹(Southernblotting)-用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的

分析

DNA样品经限制性内切酶消化后行琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，将含有不同大

小DNA片段的凝胶在变性溶液中处理，然后将胶中的变性DNA分子转移到NC膜

上，转移完成后，将含DNA片段的NC膜在紫外交联仪内处理，使DNA固定于NC

膜上，即可用于杂交反应

DNA印迹技术主要用于基因组DNA的定性和定量分析

（二）RNA印迹(Northernblotting)-用于RNA的定性定量分析。

利用与DNA印迹相类似的技术来分析RNA就称为RNA印迹。相对于Southern

blot-ting，有人将RNA印迹称为Northernblotting，其技术原理与Southern

blotting相同。

RNA分子较小，在转移前无需进行限制性内切酶切割，而且变性RNA的转移效率

也比较高。

RNA印迹技术目前主要用于检测特定组织或细胞中已知的特异mRNA和非编码RNA

的表达水平，也可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况。尽管用RNA

印迹技术检测RNA的敏感性较PCR法低，但是由于其特异性强，假阳性率低，仍

然被认为是最可靠的mRNA和非编码RNA定量分析方法之一。

（三）蛋白质的印迹(Westernblotting)-用于蛋白质定性定量及相互作用研

究

蛋白质在电泳之后也可以从胶中转移并固定到膜型材料上，再依靠与溶液中相应

的蛋白质分子相互结合来进行定性定量分析，其中最常用的是用抗体来检测，因

此亦被称为免疫印迹

蛋白质印迹需先将混合蛋白质用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子大小分开，再将蛋白

质转移到NC膜或其他膜上。

蛋白质的分析主要靠抗体来进行。特异性抗体（称为第一抗体）首先与转移膜上

相应的蛋白质分子结合，然后用碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶标记或放射性核素

标记的第二抗体与之结合。反应之后用底物显色或放射自显影来检测蛋白质区带的

信号，底物亦可与化学发光剂相结合以提高敏感度