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β-葡聚糖对小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7的多维度作用机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

近年来，随着广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂及放射治疗的广泛应用，尤其是艾滋病患者数量的增加，真菌感染的发病率呈逐年上升趋势。不仅如此，浅部真菌病由于生活方式变迁、社会人口老龄化、美容业兴起和家庭豢养宠物等因素影响，其发病率在我国可达20%-25%，且仍在持续攀升。其中，甲真菌病在自然人群中的发病率为2%-18%，约占所有甲疾病患病率的50%和所有皮肤感染的10%，60-79岁人群患病率更是高达18.2%。而侵袭性真菌病对免疫缺陷人群威胁极大，以侵袭性曲霉病为例，2020年相关报道显示我国年发病人数高达118万，病死率在39%-100%。

与此同时，临床上大量使用抗真菌药物，使得真菌的耐药性问题愈发严重，给真菌感染的治疗带来了极大的挑战。传统的抗真菌药物种类有限，主要包括多烯类（如两性霉素B）、唑类（如氟康唑、伊曲康唑等）、棘白菌素类（如卡泊芬净、米卡芬净）和烯丙基胺类（如特比萘芬）。然而，新出现的真菌病原体往往缺乏有效的针对性治疗药物。在细菌感染领域，面对抗生素耐药性问题，噬菌体疗法研究已取得显著进展，但真菌病毒由于感染宿主特异性高且大多不引起裂解效应，限制了其在真菌感染治疗中的应用。临床治疗和农业实践中抗真菌药物的不当使用，如临床中长期使用亚治疗剂量药物，以及农业中唑类等药物的广泛应用，都与真菌耐药性发展密切相关。美国就曾出现“超级真菌”耳念珠菌在医院和疗养院蔓延，部分患者对三种主要抗真菌药物均耐药的情况。

β-葡聚糖广泛存在于各类真菌的细胞壁中，在真菌致病过程中发挥着重要作用。深入研究β-葡聚糖对免疫细胞的作用机制，对于开发新型抗真菌药物具有重要的指导意义。通过阐明β-葡聚糖与免疫细胞的相互作用，有望发现新的药物作用靶点，从而研发出更有效的抗真菌药物，为解决真菌耐药性问题提供新的途径。同时，这也有助于我们更深入地理解真菌感染的发病机制和免疫调节过程，为临床治疗提供更坚实的理论基础。

1.2β-葡聚糖概述

β-葡聚糖是一种多糖类生物大分子，由葡萄糖单体通过β-糖苷键连接而成，其结构中β-糖苷键的类型和连接方式决定了β-葡聚糖的物理化学性质和生物活性。根据糖苷键类型，可分为(1→3)、(1→4)、(1→6)等。其中，(1→3)-β-葡聚糖是真菌细胞壁的主要成分之一，通常以线性或分支状结构存在，主链由β-1,3-糖苷键连接葡萄糖残基，部分还含有β-1,6-分支。这种独特的结构赋予了β-葡聚糖多种生物活性，使其在医药、食品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。

β-葡聚糖在真菌细胞壁中起着维持细胞结构稳定和保护细胞的重要作用。不同来源的β-葡聚糖在结构和组成上存在一定差异，常见的来源包括谷物（如燕麦、大麦，主要为β-(1→3/1→4)-葡聚糖）、真菌和酵母（如酵母、蘑菇，主要为β-(1→3/1→6)-葡聚糖）。酵母β-葡聚糖主要来源于酵母细胞壁，以β-1,3-葡聚糖为主链，同时含有少量β-1,6-分支。这些来源的β-葡聚糖由于其结构和来源的不同，在生物活性和应用方面也各有特点。

1.3RAW264.7细胞特性与研究价值

RAW264.7细胞是一种源自BALB/c小鼠的单核巨噬细胞白血病细胞系，于1975年从BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞中分离，经Abelson鼠白血病病毒诱导永生化。该细胞系具有典型的巨噬细胞功能特性，无需胰酶消化，易于传代，因此成为实验中常用的工具细胞，在免疫学、炎症反应及肿瘤微环境研究等领域发挥着重要作用。

在细胞形态方面，RAW264.7细胞贴壁生长，呈不规则圆形或梭形，激活后可伸出伪足。其生长特性为贴壁生长，在培养过程中，适宜的培养基为DMEM高糖培养基（含10%FBS+1%双抗），pH7.2-7.4，每2-3天需更换新鲜培养基，传代比例一般为1:3至1:5，避免过度融合（90%抑制增殖）。在生物学功能上，RAW264.7细胞保留了巨噬细胞的吞噬功能，能够胞饮中性红，吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，吞噬荧光微球效率可达70%。同时，它还能响应脂多糖（LPS）等刺激，分泌TNF-α、IL-6等炎症因子，表达TLR4、CD14等模式识别受体，常用于研究NF-κB、MAPK等信号通路。

在免疫研究中，RAW264.7细胞具有不可替代的地位。它可以作为研究天然免疫和炎症反应的经典模型，通过LPS诱导模型，能够模拟脓毒症等炎症