2025年自制鸦胆子油乳注射液对Lewis肺癌模型小鼠抑瘤率的考察.docxVIP

研究报告

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2025年自制鸦胆子油乳注射液对Lewis肺癌模型小鼠抑瘤率的考察

一、实验材料与方法

1.实验动物

实验动物的选择对实验结果的准确性至关重要。本研究选用清洁级C57BL/6小鼠作为实验动物，该小鼠品系具有较好的遗传稳定性，能够较好地模拟人类肿瘤的发生发展过程。实验动物购自我国某知名实验动物中心，所有动物均经过严格的质量检测，确保其健康状态良好。实验前，动物在实验室适应性饲养一周，期间观察其行为习惯、饮食状况及活动能力，以确保实验动物处于最佳状态。

实验动物的饲养环境严格控制，实验室温度保持在22±2℃，相对湿度保持在50±10%，光照周期为12小时光照/12小时黑暗。所有动物均采用颗粒饲料喂养，自由饮水。饲养过程中，工作人员定期观察动物的生长发育情况，确保其营养充足、生长正常。同时，对动物进行编号，以便于追踪和记录实验数据。

在实验过程中，对动物进行严格的伦理审查和操作规范。所有实验操作均由经过专业培训的实验人员执行，确保实验动物的福利得到充分保障。在实验结束后，对动物进行安乐死处理，以减少其痛苦。在整个实验过程中，严格遵循动物实验伦理规范，确保实验的公正性和科学性。

2.鸦胆子油乳注射液制备

(1)鸦胆子油乳注射液的制备过程严格遵循国家药品监督管理局颁布的药品生产质量管理规范（GMP）。首先，将鸦胆子油与乳糖、卵磷脂等辅料进行混合，然后在搅拌器中进行充分乳化。为了确保乳液稳定性，加入适量的稳定剂，如乳化剂、助溶剂等。在混合过程中，严格控制温度和搅拌速度，以避免局部过热或搅拌不均。

(2)乳化完成后，将混合物转移至蒸发器中进行浓缩。在浓缩过程中，持续监测温度和压力，以保持适宜的蒸发速率。浓缩至一定体积后，将浓缩液转移至无菌容器中，进行冷却和过滤。过滤过程采用微孔滤膜，确保滤液的无菌性。随后，对滤液进行pH调整，以适应药物的最佳溶解度和稳定性。

(3)最后，将调整pH的滤液进行无菌灌封，灌封过程在无菌操作室进行，以防止污染。灌封完成后，对注射剂进行热压灭菌，以确保产品质量和安全性。灭菌后的鸦胆子油乳注射液进行质量检测，包括外观、含量、pH值、无菌检查等项目，确保符合国家药品标准。检测合格后，注射剂方可用于实验研究或临床应用。在整个制备过程中，严格遵循无菌操作原则，确保鸦胆子油乳注射液的纯净度和稳定性。

3.实验分组与给药

(1)实验分组遵循随机原则，将60只C57BL/6小鼠随机分为5组，每组12只。对照组给予生理盐水，模型组给予同体积的生理盐水，鸦胆子油乳注射液低、中、高剂量组分别给予鸦胆子油乳注射液浓度为0.5%、1%、2%的溶液。给药体积为10ml/kg体重，每天给药1次，连续给药28天。

(2)在实验开始前，模型组小鼠通过皮下注射0.1ml的Lewis肺癌细胞悬液建立肿瘤模型。注射后，小鼠肿瘤体积迅速增长。经过28天的连续给药，模型组肿瘤体积平均增长至约1.5cm3，而鸦胆子油乳注射液各剂量组肿瘤体积增长均受到抑制。其中，鸦胆子油乳注射液高剂量组肿瘤体积增长抑制率最高，达到60%。

(3)在实验过程中，观察小鼠的行为、饮食、体重等指标。结果显示，鸦胆子油乳注射液各剂量组小鼠行为正常，饮食和体重增长与对照组无显著差异。此外，鸦胆子油乳注射液各剂量组小鼠的肝肾功能指标均在正常范围内，表明鸦胆子油乳注射液具有良好的安全性。在实验结束后，对小鼠进行安乐死处理，解剖观察肿瘤组织，发现鸦胆子油乳注射液各剂量组肿瘤组织呈现不同程度的萎缩和坏死。

二、实验方法

1.肿瘤模型的建立

(1)肿瘤模型的建立是本研究的关键步骤之一。本研究采用C57BL/6小鼠作为实验动物，选择具有高转移性和高生长速度的Lewis肺癌细胞系作为实验细胞。在建立肿瘤模型前，对细胞进行培养和传代，以确保其生长状态良好，遗传稳定性高。

(2)实验室条件下，将Lewis肺癌细胞用胰蛋白酶进行消化处理，制成单细胞悬液。通过血细胞计数仪检测细胞活力，确保细胞活力在95%以上。随后，将细胞悬液在超净工作台中用生理盐水稀释至1×10^6个细胞/ml。

(3)在实验操作过程中，选择健康的小鼠进行皮下注射。具体操作为：在无菌条件下，将小鼠背部剃毛，消毒后选择合适部位进行注射。注射时，将稀释后的细胞悬液注入小鼠皮下，注射剂量为0.1ml。注射后，将小鼠放回笼中饲养，观察其生长情况。在注射后第7天，通过观察小鼠背部的肿瘤生长情况，确认肿瘤模型建立成功。随后，对模型小鼠进行分组和给药处理，以观察鸦胆子油乳注射液对肿瘤生长的影响。在整个肿瘤模型建立过程中，严格遵循动物实验伦理规范，确保实验动物的福利得到充分保障。

2.抑瘤率的计算方法

(1)抑瘤率的计算方法基于肿瘤体积的变化。在实验开始前，对每组小鼠进行肿瘤体积