CN110935403A 一种高效制作琼脂糖凝胶的方法 （云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(43)申请公

(10)申请公布号CN110935403A布日2020.03.31

(21)申请号201911245382.3

(22)申请日2019.12.07

(71)申请人云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所

地址650205云南省昆明市盘龙区北京路

2238号

(72)发明人陈玲殷富有钟巧芳程在全

王波张敦宇陈越付坚柯学王玲仙余腾琼肖素勤蒋聪

(74)专利代理机构云南凌云律师事务所53207代理人康珉

(51)Int.CI.

B01J13/00(2006.01)

权利要求书1页说明书5页

(54)发明名称

一种高效制作琼脂糖凝胶的方法

(57)摘要

CN110935403A本发明涉及一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其包含配制琼脂糖溶液、溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，所述溶解琼脂糖的方法为高压灭菌锅加热溶解，相对于传统水浴加热或微波炉加热溶解，操作简单方便灵活，实用性强，既能提高效率又可以保证安全性，且本

CN110935403A

CN110935403A权利要求书1/1页

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1.一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，包括配制琼脂糖溶液、溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，其特征在于，所述溶解琼脂糖方法为将配制好的琼脂糖溶液放置于高压灭菌锅内加热溶解。

2.如权利要求1所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，所述高压灭菌锅加热溶解温度为115℃~121℃,时间为20min～40min。

3.如权利要求1所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，所述配制琼脂糖溶液方法为称取琼脂糖置于玻璃瓶中，加入琼脂糖电泳缓冲液，配制成实验所需浓度的琼脂糖溶液，琼脂糖溶液体积不能超过玻璃瓶体积的1/2,用封口膜封住玻璃瓶口。

4.如权利要求1至4任一项所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，可在加热溶解的琼脂糖溶液中加入核酸染料。

5.如权利要求1所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制琼脂糖溶液：称取琼脂糖置于玻璃瓶中，加入琼脂糖电泳缓冲液，配制成实验所需浓度的琼脂糖溶液，琼脂糖溶液体积不能超过玻璃瓶体积的1/2,用封口膜封住玻璃瓶口；

(2)溶解琼脂糖：将配制好的琼脂糖溶液放入高压灭菌锅，115℃~121℃高压20min~40min,待温度降到60℃~70℃时取出，加入核酸染料，并轻轻混匀；

(3)铺胶：取出洗净并晒干的胶床，将步骤2得到琼脂糖溶液均匀地倒入胶床内，插上梳子；

(4)凝固成型获得琼脂糖凝胶：室温静置30～40min充分凝固后，垂直拔下梳子，将带琼脂糖凝胶的胶床置于电泳槽中进行电泳，或将琼脂糖凝胶与胶床分开，用保鲜膜包裹住放于4℃冰箱备用。

6.一种再生琼脂糖凝胶的制备方法，收集电泳完的琼脂糖凝胶块放入玻璃瓶，重复权利要求1至5任一项所述的溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，可再次制作出新的琼脂糖凝胶。

CN110935403A说明书1/5页

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一种高效制作琼脂糖凝胶的方法

技术领域

[0001]本发明涉及一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，属于生物技术研究领域。

背景技术

[0002]琼脂糖凝胶电泳技术是一种常见的实验室技术，在分离蛋白、核酸等方面应用较广，尤其在分离纯化和鉴定核酸(DNA和RNA)方面最为普遍，该技术主要是以琼脂糖作为支持介质，当用低浓度的核酸染料染色后，在紫外光下至少可以检出1～10ng的核酸条带，从而可以确定核酸片段在凝胶中的位置。目前，一般琼脂糖凝胶的制备，是将琼脂糖通过微波炉加热溶解，自然冷却到60～70℃时，加入核酸染料，倒入胶床，插上梳子室温凝固40min后用于电泳，整个过程需50min左右。但市售的微波炉一般空间有限，若样品量较大，需重复溶胶。并且微波加热琼脂糖的时间较难掌控，时间太长容易变干，时间太短溶解不充分，同时琼脂糖微波加热过程中容易暴沸，对操作人员的经验要求特高。

[0003]琼脂糖是从红藻中提取的链状中性多糖，是琼胶去除琼脂果胶的产物，1937年第一次从琼脂中分离琼脂糖之后发展至今，琼脂糖以其近似理想的凝胶特性，已成为现代生物