瑞氏染色技术原理与操作流程.pdfVIP

瑞氏染色原理及操作步骤

瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。

一、原理：瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美篮混合经化学作用后，

变成中性之伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。此三种

分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆。

由于系中性，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等

颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。

二、试剂配制：1、瑞氏试剂瑞氏（粉）1克，加不含醋酮之

甲醇600毫升溶解过滤后即成。混合方式可将瑞氏置于研钵内，

加适量甲醇混合研磨，使溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，

再放入甲醇继续溶解剩下，直至及甲醇均用完为止，然后过

滤，以深色中性之玻璃瓶储备待用。亦可将1克一次加入600毫

升甲醇中，盛深色玻璃瓶内，塞好瓶口，置于温暖而之处或37

度温箱内，每日振荡5min，连续7天以上，然后过滤储备用。染液

宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。2、缓冲液由1%的

磷酸氢二钠和1%的磷酸二氢钾各30毫升加蒸馏水1000毫升配成，

或以上两药各1克加2500毫升左右蒸馏水制成。以石蕊试纸检验、

调整酸碱度，使PH在6.5-7之间即可。缓冲液亦可永新鲜蒸馏水

或煮沸后密闭保存的蒸馏水。如蒸馏水与空气过多接触，则可因吸收

空气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。

三、染色步骤1将已编号之涂片水平置于染色板或者染色架上，

涂片两端各划一道蜡笔线，主要防止染液外溢。2滴加瑞氏染色

液。其多少依标本所占面积大小而定，一般为4-8滴，至染液将标

本完全盖住为止。染液不宜过少，否则，挥发后，易产生沉淀；

不可过多，以免因过盛而流失，影响染色。31-2分钟后，滴入缓

冲液（染液与缓冲液的比例约为1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。

以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口

吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。4自缓

冲液滴入10-15分钟后，用自来水冲洗。冲洗时应将玻片持平，以流

水滴入使染液及缓冲液自玻片边缘溢出，沉淀即随水浮去。冲洗

时，切忌水力过大，以免将标本并染液同时冲走；冲洗前切不可先将

染液倾去，否则沉淀将附于标本上不能除去，染色时间与染液的性质、

酸碱度、气温等关系甚大，因此应灵活掌握。先冲洗一张，于低

倍镜下初步检查，如细胞核浆分明，颗粒清楚，表示染色满意，此时，

始可将其余涂片全部冲洗。如染色过浅，则需延长染色时间。5冲

洗、待干、镜检。如天冷或空气湿度大，可用吸水纸吸水加快干燥

速度。但切忌用力重压或擦拭，以免将标本中的细胞成分擦去或破坏。

四、优缺点其主要优点是染色方法简单、省时、易于推广，且染色

较清晰，特别是胞浆及其中颗粒受染良好。根据我们的体会，在细胞

学检查中，除个别情况外，瑞氏染色基本上可以解决绝大部分常见病

的诊断问题。其不足之处是核染质及核膜的结构往往不如巴氏染色清

楚。

五染色不佳的及纠正方法：

1、染色过深A表现镜下细胞变小，核与浆均呈深蓝或蓝黑色、

结构不清，红细胞呈碱性色。B染色时间过长；染液过多或

缓冲液过少；染液或缓冲液偏碱；夏季染色过程中甲醇挥发。C纠

正用甲醇脱色后重复染色。亦可用甲醇或瑞氏染液脱色数秒后冲

洗，再行镜检，脱色时间根据具体情况决定。

2、染色过浅A表现胞浆、浆内颗粒及核均不