文献分享丨使用直接进样质谱法定量分析胆固醇和胆固醇酯类化合物.pdfVIP

文献分享丨使用直接进样质谱法定量分析胆固醇和胆固醇酯类

化合物

文章题目为Quantificationofcholesterolandcholesterylester

bydirectflowinjectionhighresolutionFTMSutilizingspecies-

specificresponsefactors，是近期发表在AnalyticalChemistry上

的一篇文章。

本文使用直接进样方式对游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）进

行定量分析。

目前ESI-MS/MS方法通常被用来分析胆固醇酯类化合物，对游离

胆固醇进行定量分析时需要对其进行衍生化，变成相应的胆甾醇醋酸

酯或硫酸酯。由于游离胆固醇的电离效率较低以及其极易发生源内裂

解，使得我们很难使用ESI直接进样法对游离胆固醇进行定量分析。近

期有研究者使用基于芯片技术的nano-ESI（流速大约200nL/min）离

子源结合高分辨质谱改善了直接进样法游离胆固醇进行定量分析的表

现，在全扫描、PRM和multiplexedPRM（MSX）三者对比中，结

果显示MSX在游离胆固醇定量分析中表现最好。因此作者在本研究中

就尝试使用普通ESI结合MSX-HRMS技术对游离胆固醇和胆固醇酯进

行定量分析。

作者使用热电的Q-ExactiveOrbitrap质谱进行数据采集，之后使

用ALEX软件（Analysisoflipidexperiments(ALEX):asoftware

frameworkforanalysisofhigh-resolutionshotgunlipidomics

data.PLoSOne2013,8(11),e79736）进行数据处理，包括Peak

assignment和Peakpicking。

方法

作者使用一系列不同类型的脂肪酸酯标准品（包括饱和的、单不

饱和和多不饱和系列）来考察质谱的响应。

数学模型的建立：

使用胆固醇酯和仪器响应之间的关系建立数学模型

如图所示，主要考虑以下两种线性关系：

1.质谱响应和碳原子数之间

2.质谱响应和双键数之间

质谱的响应还会受到其他脂质类成分的影响，如上图所示，当加

入TG和PC时，CE的响应会发生变化。基质效应因素A定义为：

Species-specific响应用于校正CE的定量分析。计算公式如下：

其中C为酰基链的碳原子个数，DB为双键的数量

结果

游离胆固醇的定量分析：

铵根加合的FC和CE容易发生源内裂解产生质子化的胆甾二烯碎

片离子m/z369.3561，因此作者使用FC和CE17:0标准品来考察实

验参数对源内裂解程度的影响。结果显示两类物质对源内裂解的敏感

性有显著差异，27%的FC和74%的CE17:0未被打碎。

作者使用MSX技术来对FC进行准确的定量分析。作者对MSX在

17500分辨率下的检测结果和作者之前建立的衍生化之后使用QQQ质

谱进行检测的结果进行对比，结果发现这些方法得到的结果并无相关

性，其中MSX方法得到的数值明显高于其他方法。接下来作者就将仪

器的分辨率进一步提高，观察是否有isobaric离子的干扰。结果如上

图所示，随着分辨率的提高，碎片离子中可以观察到一个干扰离子

m/z369.337，这个离子可能是单酰甘油20:0的碎片离子。为了能够

将胆甾二烯和它的isobaric干扰（相差0.015Da）进行区分，作者选

择在140000分辨率进行检测，使质谱峰可以基线分离。

因为FC的铵根加合离子的强度较低，作者想考察MSX方法定量

的准确性，所以作者就与衍生化之后使用MSX分析的方法进行对比。

结果显示，衍生化显著提高了FC