细胞生物学研究方法：显微成像技术与细胞分选技术.pdfVIP

章节2细胞生物学研究方法

09逸仙班辛慧敏

显微成像技术

包括直接成像和间接成像。

显微技术是细胞生物学做基本的研究技术，包括光学显微技术和电子显微技术。

1）光学显微技术

通常将光镜下所见的物体的结构称为显微结构，如线粒体、体、核仁等可

以在光镜下观察，均属显微结构。

在光学显微镜中观察不到而只能在电子显微镜下观察的结构成为亚显微结构或

者超微结构。

几种常用的光学显微技术包括普通双筒显微技术、荧光显微镜、相差显微镜、

暗视野显微镜、倒置显微镜。

·荧光显微镜可用于研究细胞内物质的吸收及化学物质的分布及定位等。

有自发荧光和诱发荧光。工作原理是利用紫外线装置（弧光灯、水银灯等）发出

紫外线光源，通过照明设备把显微固定的切片或活然的细胞出来。

·相差显微镜的优点是能观察无色、透明、活细胞中的结构。它是利用光的衍

射和特性使相位差变成振幅差，表现为明与暗的对比。

自显影是用感光胶片测定细胞内某种被性标记的物质在细胞固定时

所在的位置。

2）电子显微镜

是研究亚显微结构的主要工具，透射和扫描电镜是两类主要的电子显微镜。

电子显微镜有透射扫描电子显微镜、免疫电子显微镜、高压电子显微镜等。

镜像形成的3个基本要素：

·照明系统

·被观察的样品

·聚焦和成像的透镜系统

细胞化学技术

包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、自显影技术、示踪细胞化学技

术等。

·酶细胞化学技术

就是同通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位：

底物—(酶+条件)→初级反应产物—（捕捉剂）→最终反应产物。

·免疫细胞化学技术

是利用免疫反应定位组织活细胞中抗原成分分布的一类技术，主要有免疫荧

光技术和免疫电镜技术两大类。

细胞分选技术

主要用流式细胞仪对细胞进行分选，并对单个细胞或其他生物微粒进行定

量分析，包括测量细胞的大小、形状、细胞、RNA含量和细胞总蛋白等。

细胞分选中所用的标记细胞的探针是能够同待分选细胞表面特征性蛋白（抗原）

结合的抗体，而这种抗体又能同某种荧光结合。

流室细胞分选技术是细胞生物学和现物学技术中的重要技术，不仅用于分

选细胞，也可用于分选。

细胞工程技术

细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域，主要利用细胞生物学的原理

和方法，结合工程学的技术，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细

胞遗传性的技术，主要内容包括：细胞融合、细胞生物反应器、转移、细

胞器移植、转移、细胞及组织培养。

细胞培养：

体外培养需注意3个环节：营养、环境和的排除。

原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和后立即进行培养；原代培养物经

首次传代成功后即成为细胞系。从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培

养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群称为细胞株，可培养到40~50

代。

细胞融合与单克隆抗体技术

动物细胞核移植克隆技术

分离技术：

包括细胞组分的分离和生物大分子的分离。

·离心分离技术：影响被分离的颗粒在离心过程中行为的主要因素是颗粒的体积

和密度。

常用的是速度离心和等密度离心。

速度离心是根据被分离物质的体积差异：1）差速离心主要采取逐渐提高离心速

度的方法分离不同大小的细胞器。2）移动区带离心：在离心过程中大小、形状、

密度不同的颗粒就会分开。需用蔗糖和甘油建立轻微的连续密度梯度，目的是防

止扩散，待分离颗粒的密度比离心管中介质的密度都要大。常用蔗糖密

度梯度离心。

等密度离心分离样品主要是根据被分离样品的密度，介质产生的密度梯度需覆盖

贷分离物质的密度，通过离心是不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。

·层析分离技术：凝胶过滤层析、亲和层析、离子交换层析。

分子生物学方法：

工程技术、作图与人类组计划、PCR技术、选择性剔除与转基

因鼠、乳腺生物反应器技术