CN106134995A 一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法 （江苏大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN106134995A

(43)申请公布日2016.11.23

(21)申请号201610507227.4

(22)申请日2016.06.30

(71)申请人江苏大学

地址212013江苏省镇江市京口区学府路

301号

(72)发明人吴沿友谷睿智邢德科吴沿胜姚香萍黎明鸿付为国

(51)Int.CI.

A01H4/00(2006.01)

权利要求书1页说明书4页

(54)发明名称

一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法

(57)摘要

CN106134995A本发明公开一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，属于生物技术和农业工程领域，本发明所述的方法包括诸葛菜的芽簇诱导、芽繁培养和芽的包埋和人工种子胶囊制备，所述芽的包埋和人工种子胶囊制备过程中内种皮包埋液是含纳米二氧化钛nTiO?、NAA、MS培养基和蔗糖的质量浓度为6%海藻酸钠水溶胶、外种皮包埋液是含有纳米二氧化钛nTiO2、纳米二氧化硅nSiO?的质量浓度为7%或8%海藻酸钠水溶胶。本发明制作的人工种子，可以通过双层包埋技术将杀菌剂和营养物质分离，同时调节内外种皮机械强度；该人工种子在有菌环境下具有生根发芽率高，污染率低，对外植体毒害作用低等特点；利用

CN106134995A

CN106134995A权利要求书1/1页

2

1.一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1),诸葛菜的芽簇诱导：取诸葛菜幼苗，无菌水冲洗，切取腋芽和顶芽，消毒后进行芽簇诱导培养；

步骤(2),诸葛菜的芽繁培养：取步骤(1)芽诱导培养的诸葛菜组培苗，切取幼芽，转接到芽繁培养基上进行芽繁培养；

步骤(3),诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备：取步骤(2)中在芽繁培养基上生长的幼芽，切取若干个一定长度的芽并逐个放在内种皮包埋液表面，所述内种皮包埋液是含纳米二氧化钛nTiO?、NAA、MS培养基和蔗糖的质量浓度为6%海藻酸钠水溶胶；用玻璃吸管先吸取少量包埋液，再吸入一个诸葛菜芽，然后滴入质量浓度为2%的CaCl?溶液中，络合反应9-11min形成固态人工种子；用镊子取出所述固态人工种子，放在外种皮包埋液中，使外种皮均匀裹上一层包埋液，所述外种皮包埋液是含有纳米二氧化钛nTi02、纳米二氧化硅nSiO?的质量浓度为7%或8%海藻酸钠水溶胶；用镊子将人工种子取出，放入质量浓度为2%的CaCl?溶液中，络合反应1.5-2.5min形成双层包埋的固态人工种子。

2.根据权利要求1所述的一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，所述步骤(1)中的芽簇诱导培养基的成分包括：MS培养基、2mg/L6-BA、0.2mg/LNAA、3%蔗糖及0.65%琼脂；芽簇诱导过程的光照强度为2000～3000Lux日光灯照射12小时。

3.根据权利要求1所述的一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，所述步骤(2)中的芽繁培养基的成分包括：MS培养基、2.5mg/L6-BA、0.2mg/LNAA、3%蔗糖及0.65%琼脂；芽繁培养的光照强度为2000～3000Lux日光灯照射12小时。

4.根据权利要求1所述的一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，所述步骤(3)中幼芽在芽繁培养基中的生长时间为30天；切取若干个芽的长度为8mm。

5.根据权利要求1所述的一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，所述步骤(3)中内种皮包埋液的成分包括：质量浓度为6%海藻酸钠水溶胶、0.25-0.3mg/LNAA、10-15g/LnTi02、1/2MS培养基、3%蔗糖；外种皮包埋液的成分包括：质量浓度为7%或8%海藻酸钠水溶胶、30-40g/LnTiO?、15-30g/LnSiO?。

6.根据权利要求5所述的一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，所述nTiO?为锐钛型纳米Ti02,其粒径为15±5nm;所述nSiO?粒径为15±5nm。

7.根据权利要求5所述的一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于，所述内种皮包埋液中NAA为0.25mg/L,nTiO?为15g/L;所述外种皮包埋液中nTiO?为30g/L,nSiO?为15g/L,海藻酸钠质量浓度为7%。

CN106134995A